查看更多>>摘要：目的 探讨白术转腰汤(《辨证录》转腰汤加鸡血藤、苏木、牛膝)对腰椎黄韧带纤维化的影响及其免疫调控机制.方法 ①采用随机数字表法将 24 只雄性SD大鼠分为 4 组,即正常组、模型组、氯磷酸盐组和白术转腰汤组,每组6 只.除正常组外,其余各组均采用腰椎失稳法建立黄韧带纤维化模型.白术转腰汤组灌胃白术转腰汤(13.6 g/kg),其余各组给予等量生理盐水灌胃,每天1 次,持续30 d.氯磷酸盐组于造模手术后即刻及第 9、18、27 天沿原切口皮下注射氯磷酸二钠脂质体(5 g/L,0.5mL).30 d后过量麻醉处死大鼠,采用HE染色和Masson染色对大鼠黄韧带进行组织学评估,计算胶原容积分数(CVF);采用免疫组化染色法检测黄韧带中转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)蛋白表达,采用免疫荧光双标法检测M2 巨噬细胞中CD163 与TGF-β1 蛋白表达.②使用RT-qPCR法检测M2 巨噬细胞与成纤维细胞单独培养、共培养,及经过白术转腰汤含药血清预处理的M2 巨噬细胞与成纤维细胞共培养 3 种方式下,M2 巨噬细胞与成纤维细胞TGF-β1、TNF-α和IL-1β的mRNA表达.结果 ①与正常组比较,模型组大鼠可见黄韧带纤维致密、扭曲,免疫细胞浸润,CVF增加,黄韧带组织中TGF-β1、TNF-α、IL-1β蛋白表达增加(P<0.05);与模型组比较,氯磷盐酸组与白术转腰汤组细胞外基质堆积改善,黄韧带CVF降低,黄韧带组织中TGF-β1、TNF-α、IL-1β 蛋白表达降低(P<0.05);与氯磷盐酸组比较,白术转腰汤组细胞外基质堆积增加,CVF升高,黄韧带组织中TGF-β1、IL-1β蛋白表达升高(P<0.05);免疫荧光结果提示,正常组与氯磷盐酸组未见CD163、TGF-β1 蛋白表达,模型组CD163和TGF-β1 蛋白大量表达并共定位,白术转腰汤组可见较多CD163 蛋白表达,但TGF-β1 蛋白表达极少.②与单独培养比较,共培养增加了M2 巨噬细胞中TGF-β1、IL-1β及成纤维细胞中TNF-α、IL-1β的mRNA表达,而经过白术转腰汤含药血清预处理后的共培养下,M2 巨噬细胞中TGF-β1、IL-1β和成纤维细胞中TNF-α、IL-1β的mRNA表达较未预处理的共培养降低(P<0.05).结论 白术转腰汤可抑制大鼠腰椎黄韧带纤维化进程,降低M2 巨噬细胞中TGF-β1 和IL-1β的表达,并影响成纤维细胞TNF-α和IL-1β的表达,从而抑制M2 巨噬细胞TGF-β1 介导的免疫炎症反应,发挥抑制黄韧带炎症-纤维化正反馈的作用.
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