首页期刊导航|吉林大学学报（医学版）
期刊信息/Journal information
吉林大学学报（医学版）
吉林大学
吉林大学学报（医学版）

吉林大学

李玉林

双月刊

1671-587X

xuebao@jlu.edu.cn

0431-85619278

130021

吉林省长春市新民大街828号

吉林大学学报（医学版）/Journal Journal of Jilin University(Medicine Edition)CSCD北大核心CSTPCD
查看更多>>本刊是由教育部主管、吉林大学主办的综合性医药卫生类学术期刊。办刊宗旨是遵循党和国家的办刊政策及法规，报道医学科学研究的新理论、新方法和新技术,不断促进医学科学的发展和国内外学术交流。 本刊创刊于1959年，在发展过程中提高办刊质量。本刊已被多家国内外著名的检索机构及数据库收录。 本刊国内外公开发行，国外代号BM4177，国内代号12-23，10元/期，全年6期，全国各地邮局均可订阅。
正式出版
收录年代

    沉默CD147基因对姜黄素抑制前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和诱导凋亡的影响

    王馨赵杰瑞郭玉苗陈姝彤...
    1572-1586页
    查看更多>>摘要：目的:探讨姜黄素对人前列腺癌C4-2细胞和LNCaP细胞增殖、迁移及侵袭的影响,并阐明其可能的作用机制.方法:采用慢病毒转染系统分别转染C4-2 细胞和LNCaP细胞,作为shCD147-C4-2组和shCD147-LNCaP组.采用RNA干扰技术制备沉默CD147基因细胞,以转入空载体的细胞作为阴性对照,分为shNC-C4-2组(shNC-C4-2细胞)和shNC-LNCaP组(shNC-LNCaP细胞).取生长对数期C4-2、LNCap、shCD147-C4-2和shCD147-LNCaP细胞,加入 20 μmol·L-1 姜黄素,处理 0和 24 h时,显微镜观察各组细胞形态表现.噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖活性,细胞划痕实验检测各组细胞迁移率,Western blotting法检测各组细胞中凋亡、侵袭和迁移相关蛋白表达水平.结果:与C4-2组比较,沉默CD147基因后shCD147-C4-2组细胞中CD147蛋白表达量明显减少;与LNCaP组比较,沉默CD147基因后shCD147-LNCaP组细胞中CD147蛋白表达量明显减少.与处理0 h比较,20 μmol·L-1姜黄素处理24 h后C4-2组和LNCaP组部分细胞出现凋亡征象,且有典型凋亡小体存在;shCD147-C4-2组和shCD147-LNCaP组细胞凋亡现象减弱.MTT法检测,与C4-2+0 μmol·L-1 姜黄素组比较,C4-2+20 μmol·L-1 姜黄素组、C4-2+40 μmol·L-1 姜黄素组、C4-2+60 μmol·L-1 姜黄素组和 C4-2+80 μmol·L-1 姜黄素组细胞增殖活性均明显降低(P<0.01);与LNCaP+0 μmol·L-1姜黄素组比较,LNCaP+20 μmol·L-1姜黄素组、LNCaP+40 μmol·L-1姜黄素组、LNCaP+60 μmol·L-1 姜黄素组和LNCaP+80 μmol·L-1 姜黄素组细胞增殖活性均明显降低(P<0.01);与shNC-C4-2组比较,shNC-C4-2+20 μmol·L-1姜黄素组细胞增殖活性明显降低(P<0.01);与shNC-C4-2+20 μmol·L-1姜黄素组比较,shCD147-C4-2+20 μmol·L-1 姜黄素组细胞增殖活性明显升高(P<0.01);与shNC-LNCaP组比较,shNC-LNCaP+20 μmol·L-1姜黄素组细胞增殖活性明显降低(P<0.01);与shNC-LNCaP+20 μmol·L-1 姜黄素组比较,shCD147-LNCaP+20 μmol·L-1姜黄素组细胞增殖活性明显升高(P<0.01).细胞划痕愈合实验检测,姜黄素处理24 h,与C4-2组比较,C4-2+20 μmol·L-1 姜黄素组和C4-2+40 μmol·L-1 姜黄素组细胞迁移率均明显降低(P<0.01);与LNCaP组比较,LNCaP+20 μmol·L-1 姜黄素组和LNCaP+40 μmol·L-1 姜黄素组细胞迁移率均明显降低(P<0.01);与shNC-C4-2组比较,shNC-C4-2+20 μmol·L-1姜黄素组细胞迁移率明显降低(P<0.01);与shNC-C4-2+20 μmol·L-1 姜黄素组比较,shCD147-C4-2+20 μmol·L-1 姜黄素组细胞迁移率明显升高(P<0.05);与shNC-LNCaP组比较,shNC-LNCaP+20 μmol·L-1 姜黄素组细胞迁移率明显降低(P<0.01);与shNC-LNCaP+20 μmol·L-1姜黄素组比较,shCD147-LNCaP+20 μmol·L-1姜黄素组细胞迁移率明显升高(P<0.05).Western blotting法检测,与C4-2组比较,C4-2+20 μmol·L-1姜黄素组和C4-2+40 μmol·L-1姜黄素组细胞中B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、裂解的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶3(cleaved Caspase-3)和聚二磷酸腺苷(ADP)-核糖聚合酶1(PARP1)蛋白表达水平均明显升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01);与LNCaP 组比较,LNCaP+20 μmol·L-1 姜黄素组和 LNCaP+40 μmol·L-1 姜黄素组细胞中 Bax、cleaved Caspase-3和PARP1蛋白表达水平均明显升高(P<0.01),LNCaP+40 μmol·L-1 姜黄素组Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与shNC-C4-2组比较,shNC-C4-2+20 μmol·L-1 姜黄素组细胞中Bax、cleaved Caspase-3和PARP1蛋白表达水平均明显升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与shNC-C4-2+20 μmol·L-1姜黄素组比较,shCD147-C4-2+20 μmol·L-1姜黄素组细胞中Bax和cleaved Caspase-3 蛋白表达水平均明显降低(P<0.01).与shNC-LNCaP组比较,shNC-LNCaP+20 μmol·L-1 姜黄素组细胞中Bax、cleaved Caspase-3 和PARP1 蛋白表达水平均明显升高(P<0.05或P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与shNC-LNCaP+20 μmol·L-1姜黄素组比较,shCD147-LNCaP+20 μmol·L-1 姜黄素组细胞中Bax、cleaved Caspase-3和PARP1蛋白表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P<0.05).与C4-2组比较,C4-2+20 μmol·L-1 姜黄素组和C4-2+40 μmol·L-1姜黄素组细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白表达水平均明显升高(P<0.01),神经钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)蛋白表达水平均明显降低(P<0.01);与LNCaP组比较,LNCaP+20 μmol·L-1姜黄素组和LNCaP+40 μmol·L-1姜黄素组细胞中E-cadherin蛋白表达水平均明显升高(P<0.01),LNCaP+40 μmol·L-1姜黄素组细胞中N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平均明显降低(P<0.01);与shNC-C4-2组比较,shNC-C4-2+20 μmol·L-1姜黄素组细胞中N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平均明显降低(P<0.01);与shNC-C4-2+20 μmol·L-1姜黄素组比较,shCD147-C4-2+20 μmol·L-1姜黄素组细胞中E-cadherin蛋白表达水平明显降低(P<0.01),N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平均明显升高(P<0.01);与shNC-LNCaP组比较,shNC-LNCaP+20 μmol·L-1姜黄素组细胞中E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.01),N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平均明显降低(P<0.01);与shNC-LNCaP+20 μmol·L-1姜黄素组比较,shCD147-LNCaP+20 μmol·L-1姜黄素组细胞中E-cadherin蛋白表达水平明显降低(P<0.01),N-cadherin表达水平明显升高(P<0.05).结论:姜黄素对体外前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭有抑制作用,并诱导细胞凋亡,沉默CD147基因可在一定程度上降低其抑制作用和诱导细胞凋亡能力.

    姜黄素CD147前列腺肿瘤细胞侵袭细胞迁移

      原文链接:
    • 国家科技期刊平台
    • NETL
    • NSTL
    • 万方数据

    趋化因子CCL19诱导巨噬细胞M1极化对小鼠慢性胰腺炎的促进作用及其机制

    崔连鸷张晓伟翟悦潘悦...
    1587-1596页
    查看更多>>摘要：目的:探讨趋化因子C-C基序配体19(CCL19)诱导巨噬细胞M1极化对小鼠慢性胰腺炎的促进作用,并阐明其相关机制.方法:选取10只雄性C57BL/6N小鼠,提取小鼠胰腺腺泡细胞和腹腔巨噬细胞,构建巨噬细胞-腺泡细胞共培养体系,共培养体系细胞分为对照组、模型组和小干扰RNA CCL19(si-CCL19)组,显微镜下观察各组腺泡细胞形态表现.随机选取40只小鼠,分为正常组和慢性胰腺炎组,每组20只.HE染色观察2组小鼠胰腺组织病理形态表现,免疫荧光染色法观察2组小鼠胰腺组织中角质蛋白 19(CK19)、淀粉酶、M1 型巨噬细胞相关标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和F4/80表达情况及各组共培养体系细胞中腺泡细胞形态表现及CK19和淀粉酶表达情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测2组小鼠血清和各组共培养体系细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-1β水平,免疫组织化学法观察 2组小鼠胰腺组织中CCL19蛋白表达情况,Western blotting法检测2组小鼠胰腺组织和各组共培养体系细胞中CCL19蛋白和关键蛋白核因子κB(NF-κB)信号通路相关蛋白P65、磷酸化P65(p-P65)、κB抑制物激酶α/β(IKKα/β)、磷酸化IKKα/β(p-IKKα/β)、IκBα和磷酸化IκBα(p-IκBα)表达水平.结果:HE染色,正常组小鼠胰腺组织腺泡细胞的紧密排列;与正常组比较,慢性胰腺炎组小鼠胰腺组织腺泡细胞产生了明显的空泡化,即腺泡细胞导管化,小鼠胰腺炎模型制备成功.免疫荧光染色法,与对照组比较,模型组腺泡细胞严重的空泡化明显,CK19表达明显增加,淀粉酶表达明显减少;与模型组比较,si-CCL19组中腺泡细胞导管化程度降低,CK19表达明显减少,淀粉酶表达明显增加;与正常组比较,慢性胰腺炎组小鼠胰腺组织中淀粉酶表达明显减少,CK19和M1型巨噬细胞标志物iNOS及F4/80表达均明显增加.ELISA法,与正常组比较,慢性胰腺炎组小鼠血清中TNF-α、IL-6和IL-1β水平均明显升高(P<0.05);与对照组比较,模型组细胞中TNF-α、IL-6和IL-1β水平均明显升高(P<0.05);与模型组比较,si-CCL19组细胞中TNF-α、IL-6和IL-1β水平均明显降低(P<0.05).免疫组织化学法,与正常组比较,慢性胰腺炎组小鼠胰腺组织中CCL19蛋白表达明显增加.Western blotting法,与正常组比较,慢性胰腺炎组小鼠胰腺组织中CCL19蛋白表达水平和NF-κB信号通路相关蛋白p-IKKα/β、p-P65及p-IκBα蛋白表达水平均明显升高(P<0.05).与对照组比较,模型组细胞中CCL19、p-IKKα/β、p-P65和p-IκBα蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与模型组比较,si-CCL19组细胞中CCL19、p-IKKα/β、p-P65和p-IκBα蛋白表达水平均明显降低(P<0.05).结论:CCL19通过NF-κB信号通路促进巨噬细胞M1型极化,诱导炎症微环境的产生,促进胰腺炎的发生发展.

    胰腺炎C-C基序配体19巨噬细胞M1型极化核因子κB

      原文链接:
    • 国家科技期刊平台
    • NETL
    • NSTL
    • 万方数据

    罗伊氏乳杆菌对轮状病毒体内外复制的抑制作用及其对免疫因子表达的影响

    李小凤程美慧刘洋刘长城...
    1597-1605页
    查看更多>>摘要：目的:探讨罗伊氏乳杆菌对轮状病毒(RV)SA11株体内外复制的抑制作用,并阐明其对相关免疫因子表达的影响.方法:体外实验,培养并鉴定罗伊氏乳杆菌,绘制罗伊氏乳杆菌标准曲线和生长曲线,筛选罗伊氏乳杆菌培养最佳时间和最适浓度.采用5×108、10×108、50×108、100×108、200×108和500×108 CFU·mL-1罗伊氏乳杆菌感染细胞,台盼蓝染色法检测Caco-2细胞存活率.将不同浓度罗伊氏乳杆菌与RV体外共孵育并作用于Caco-2细胞,Caco-2细胞分为阴性对照组(NC组)、阳性对照组(PC组)和107、108、109 及1010 CFU·mL-1 罗伊氏乳杆菌组,免疫荧光灶法检测罗伊氏乳杆菌作用后Caco-2细胞中病毒滴度,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测不同浓度罗伊氏乳杆菌作用后Caco-2细胞中RV VP6基因拷贝数.体内实验,将25窝SPF级乳鼠分为对照组、RV组(感染SA11毒株)、Ab-NC组(抗生素处理耗竭肠道菌群)、Ab-RV组(耗竭肠道菌群后感染SA11毒株)和Ab-Lac-RV组(耗竭肠道菌群,并感染罗伊氏乳杆菌后感染SA11毒株).收取各组乳鼠灌胃第2、4、6、8和10天的粪便样本和灌胃第4天结肠组织样本,RT-qPCR法检测各组乳鼠粪便中RV VP6基因拷贝数和结肠组织中白细胞介素(IL)-1β、IL-8、IL-10、γ干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子(TNF)-α mRNA表达水平.结果:罗伊氏乳杆菌生长良好,形态圆润,呈圆形、光滑和乳白色的凸起样菌落,且边缘较整齐;革兰染色后菌体呈紫色、不规则和方形杆状;经16SrDNA测序后序列同源性为99%,提示罗伊氏乳杆菌活化成功;罗伊氏乳杆菌活菌数与吸光度(A)值呈线性关系,回归分析标准曲线为Y=0.437 5X+0.000 6,R2=0.999 4.培养0～2 h,细菌处于对数生长期,细菌生长迟缓;培养2～14 h,细菌快速生长,并于培养14～16 h时细菌生长趋于稳定,培养16 h时达到细菌生长速率顶峰,随后进入衰亡期.5×108、10×108、50×108、100×108和200×108 CFU·mL-1罗氏乳杆菌感染后,Caco-2细胞存活率均>90%,因此选用上述浓度罗氏乳杆菌感染细胞.与PC组比较,5×108、10×108、50×108、100×108和200×108 CFU·mL-1罗氏乳杆菌组Caco-2细胞中RV VP6基因拷贝数均明显降低(P<0.01).与PC组比较,107、108、109和1010 CFU·mL-1罗伊氏乳杆菌组Caco-2细胞中病毒滴度均明显降低(P<0.01).与对照组比较,Ab-NC组、Ab-RV组和Ab-Lac-RV组乳鼠肠道菌群菌落数量均明显减少,乳鼠肠道菌群耗竭成功.灌胃第2和4天,与RV组比较,Ab-RV组乳鼠粪便中RV VP6基因拷贝数明显降低(P<0.05);灌胃第4、6、8和10天,与Ab-RV组比较,Ab-Lac-RV组乳鼠粪便中RV VP6基因拷贝数明显降低(P<0.05).与对照组比较,Ab-RV组和Ab-Lac-RV组乳鼠结肠组织中IL-1β、IL-10、IFN-γ及TNF-α mRNA表达水平均明显升高(P<0.05或P<0.01),IL-8 mRNA表达水平均明显降低(P<0.05),Ab-Lac-RV组乳鼠结肠组织中IL-10 mRNA表达水平明显升高(P<0.01).结论:罗伊氏乳杆菌可能通过上调IL-1β、IL-10、IFN-γ和TNF-α mRNA表达及下调IL-8 mRNA表达,抑制RV复制.

    罗伊氏乳杆菌轮状病毒乳鼠免疫因子标准曲线

      原文链接:
    • 国家科技期刊平台
    • NETL
    • NSTL
    • 万方数据

    内侧前额叶皮质区核氧化还原蛋白对卒中后抑郁小鼠抑郁样行为的影响及其机制

    赵丹史博魏志玄崔群建...
    1606-1613页
    查看更多>>摘要：目的:探讨内侧前额叶皮质(mPFC)区核氧化还原蛋白(NXN)对小鼠卒中后抑郁(PSD)的影响,并阐明其可能的作用机制.方法:80只C57BL/6小鼠,随机选取42只分为NXN过表达腺相关病毒感染组(AAV-NXN-OE组,n=21)和阴性对照腺相关病毒感染组(AAV-NC组,n=21),剩余小鼠分为假手术组(n=20)和PSD组(n=18),注射NXN过表达腺相关病毒后,将AAV-NXN-OE组和AAV-NC组剩余小鼠分为PSD+AAV-NC组(n=18)和PSD+AAV-NXN-OE组(n=18).术前3周,采用脑立体定位法向小鼠脑组织mPFC区注射NXN过表达腺相关病毒,显微镜下观察病毒在小鼠脑组织mPFC区表达情况,Western blotting法检测小鼠脑组织中NXN蛋白表达水平.采用线栓法建立大脑中动脉闭塞(MCAO)卒中模型,术后1周使用慢性不可预见的中等应激(CUMS)结合孤养法持续干预3周,构建PSD模型小鼠.造模期间监测小鼠体质量变化,造模结束后采用糖水偏好实验、悬尾实验和强迫游泳实验观察各组小鼠抑郁样行为学表现,生化法检测各组小鼠脑组织mPFC区中丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性,2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针标记法检测各组小鼠脑组织mPFC区中活性氧(ROS)水平,Western blotting法检测各组小鼠脑组织mPFC区、杏仁核区和海马组织中NXN蛋白表达水平.结果:PSD小鼠脑组织mPFC区有大量绿色荧光,表明携带ZsGreen绿色荧光蛋白标签的AAVs病毒在PSD小鼠脑组织mPFC区成功感染并表达.与AAV-NC组比较,AAV-NXN-OE组小鼠脑组织mPFC区中NXN蛋白表达水平明显升高(P<0.05).与假手术组比较,PSD组小鼠体质量增长缓慢(P<0.05),糖水偏好率明显降低(P<0.05),小鼠在悬尾实验和强迫游泳实验中不动时间均明显增加(P<0.05);与假手术组比较,PSD+AAV-NC组小鼠糖水偏好率明显降低(P<0.05),小鼠在悬尾实验和强迫游泳实验中不动时间均明显增加(P<0.05);与PSD+AAV-NC组比较,PSD+AAV-NXN-OE组小鼠糖水偏好率明显升高(P<0.05),小鼠在悬尾实验和强迫游泳实验中不动时间均明显减少(P<0.05).与假手术组比较,PSD+AAV-NC组小鼠脑组织mPFC区中MDA和ROS水平均明显升高(P<0.05),GSH水平和SOD活性均明显降低(P<0.05);与PSD+AAV-NC组比较,PSD+AAV-NXN-OE组小鼠脑组织mPFC区中MDA和ROS水平均明显降低(P<0.05),GSH水平和SOD活性均明显升高(P<0.05).与假手术组比较,PSD组小鼠脑组织mPFC区中NXN蛋白表达水平明显降低(P<0.05),杏仁核区和海马组织中NXN蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05).结论:小鼠脑组织mPFC区中NXN过表达可改善PSD小鼠抑郁样行为,其作用机制可能与调节氧化还原平衡有关.

    卒中后抑郁核氧化还原蛋白内侧前额叶皮质氧化还原平衡

      原文链接:
    • 国家科技期刊平台
    • NETL
    • NSTL
    • 万方数据

    丁酸钠对脂多糖联合D-氨基半乳糖诱导小鼠急性肝损伤的保护作用及其机制

    龙毅游子怡谭秀英张柔...
    1614-1620页
    查看更多>>摘要：目的:探讨丁酸钠(NaB)脂多糖(LPS)联合D-氨基半乳糖(D-Gal)诱导小鼠急性肝损伤的保护作用,并阐明其作用机制.方法:30只雄性昆明小鼠随机分为对照组、模型组和NaB组,每组10只.NaB组小鼠给予200 mg·kg-1·d-1 NaB,对照组和模型组小鼠给予等体积无菌水.模型组和NaB组小鼠腹腔注射20 μg·kg-1 LPS和600 mg·kg-1 D-Gal诱导建立小鼠急性肝损伤模型.检测各组小鼠体质量和肝脏质量,计算肝脏指数.HE染色观察各组小鼠肝脏组织病理形态表现,试剂盒检测各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性及肝脏组织中总超氧化物歧化酶(T-SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)水平,Western blotting法检测各组小鼠肝脏组织中核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶1(HO-1)蛋白表达水平.结果:各组小鼠体质量比较差异均无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,模型组小鼠肝脏指数明显升高(P<0.01);与模型组比较,NaB组小鼠肝脏指数明显降低(P<0.01).HE染色观察,对照组小鼠肝脏组织结构正常,肝细胞边界清晰、大小一致,围绕中央静脉呈放射状均匀排列,且核位于细胞中央;模型组小鼠可见肝细胞排列紊乱,细胞肿胀,多发灶状肝细胞坏死,炎症细胞浸润及出血;与模型组比较,NaB组肝细胞形态结构得到改善,炎症浸润减少.与对照组比较,模型组小鼠血清中ALT和AST活性均明显升高(P<0.01);与模型组比较,NaB组小鼠血清中ALT和AST活性均明显降低(P<0.05或P<0.01).与对照组比较,模型组小鼠肝脏组织中T-SOD和CAT活性均明显降低(P<0.01),MDA水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,NaB组小鼠肝脏组织中T-SOD和CAT活性均明显升高(P<0.05或P<0.01),MDA水平明显降低(P<0.01).Western blotting法检测,与对照组比较,模型组小鼠肝脏组织中Nrf2和HO-1蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);与模型组比较,NaB组小鼠肝脏组织中Nrf2和HO-1蛋白表达水平均明显升高(P<0.01).结论:NaB对LPS/D-Gal诱导的小鼠急性肝损伤具有保护作用,其机制可能与NaB上调肝脏组织中Nrf2和HO-1蛋白表达和增加抗氧化酶活性,进而减轻肝脏氧化应激水平有关.

    丁酸钠急性肝损伤氧化应激核因子E2相关因子2血红素加氧酶1

      原文链接:
    • 国家科技期刊平台
    • NETL
    • NSTL
    • 万方数据

    小白菊内酯通过抑制Piezo1表达对机械牵张应力作用下软骨细胞凋亡的影响及其机制

    马旋杨开祥邓海黄玉成...
    1621-1631页
    查看更多>>摘要：目的:探讨小白菊内酯(PTL)通过调控机械敏感性离子通道蛋白1(Piezo1)表达对机械牵张应力作用下软骨细胞凋亡的影响,并阐明其相关作用机制.方法:按照拉伸性变量将软骨细胞分为0%、5%、10%、15%和20%拉伸组.另取软骨细胞,分为对照组、20%拉伸组、20%拉伸+5 μmol·L-1 PTL组、20%拉伸+10 μmol·L-1 PTL组和20%拉伸+20 μmol·L-1 PTL组.使用Piezo1短发夹RNA(shRNA)干扰慢病毒(sh-Piezo1)或shRNA-NC慢病毒感染软骨细胞,将软骨细胞分为sh-Piezo1组和sh-NC组,另设置空白对照组.另将软骨细胞分为20%拉伸组、20%拉伸+PTL组、20%拉伸+sh-Piezo1组和20%拉伸+sh-Piezo1+PTL组.Hoechst 33258荧光染色观察各组细胞核形态表现,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,分光光度法检测各组细胞中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3活性,CCK-8法检测各组细胞增殖率,Fluo-4/AM荧光探针法检测各组细胞中钙离子(Ca2+)水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中Piezo1 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中Piezo1蛋白表达水平.结果:Hoechst 33258荧光染色观察,随着拉伸量逐渐增加,0%、5%、10%、15%和20%拉伸组软骨细胞细胞核呈碎块状致密浓染的软骨细胞数量逐渐增加.流式细胞术检测,与0%拉伸组比较,5%、10%、15%和20%拉伸组软骨细胞凋亡率均明显升高(P<0.01);与对照组比较,20%拉伸组软骨细胞中细胞凋亡率明显升高(P<0.05);与20%拉伸组比较,20%拉伸+5 μmol·L-1 PTL组、20%拉伸+10 μmol·L-1 PTL组和 20%拉伸+20 μmol·L-1 PTL组软骨细胞细胞凋亡率均明显降低(P<0.05);与 20%拉伸组比较,20%拉伸+PTL组和20%拉伸+sh-Piezo1组软骨细胞凋亡率均明显降低(P<0.05).分光光度法检测,与0%拉伸组表示,5%、10%、15%和20%拉伸组软骨细胞中Caspase-3活性均明显升高(P<0.01);与对照组比较,20%拉伸组软骨细胞中Caspase-3活性明显升高(P<0.05);与20%拉伸组比较,20%拉伸+5 μmol·L-1 PTL组、20%拉伸+10 μmol·L-1 PTL组和20%拉伸+20 μmol·L-1 PTL组软骨细胞中Caspase-3活性均明显降低(P<0.05);与20%拉伸组比较,20%拉伸+PTL组和20%拉伸+sh-Piezo1组软骨细胞中Caspase-3活性均明显降低(P<0.05).CCK-8法检测,与0 μmol·L-1 PTL组比较,40.00、80.00 和 160.00 μmol·L-1 PTL组软骨细胞增殖率均明显降低(P<0.05),提示20.00 μmol·L-1 PTL为最高无毒性作用浓度.Fluo-4/AM荧光探针法检测,与对照组比较,20%拉伸组软骨细胞中Ca2+水平明显升高(P<0.05);与20%拉伸组比较,20%拉伸+5 μmol·L-1 PTL组、20%拉伸+10 μmol·L-1 PTL组和 20%拉伸+20 μmol·L-1 PTL组软骨细胞中Ca2+水平均明显降低(P<0.05);与20%拉伸组比较,20%拉伸+PTL组和20%拉伸+sh-Piezo1组软骨细胞中Ca2+水平均明显降低(P<0.05).RT-qPCR法检测,与空白对照组和sh-NC组比较,sh-Piezo1组软骨细胞中Piezo1 mRNA表达水平明显降低(P<0.05).Western blotting法检测,与对照组比较,20%拉伸组软骨细胞中Piezo1蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与20%拉伸组比较,20%拉伸+5 μmol·L-1 PTL组、20%拉伸+10 μmol·L-1 PTL组和20%拉伸+20 μmol·L-1 PTL组软骨细胞中Piezo1蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);与空白对照组和sh-NC组比较,sh-Piezo1组软骨细胞中Piezo1蛋白表达水平明显降低(P<0.05).结论:PTL可抑制高强度周期性机械牵张应力诱导的软骨细胞凋亡,其作用机制可能与抑制Piezo1介导Ca2+内流引起的细胞凋亡有关.

    小白菊内酯机械敏感离子通道蛋白1机械牵张应力软骨细胞细胞凋亡

      原文链接:
    • 国家科技期刊平台
    • NETL
    • NSTL
    • 万方数据

    miR-30c-5p对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用及其机制

    赵斌杨金叶李支尧毕城伟...
    1632-1643页
    查看更多>>摘要：目的:探讨微小RNA(miR)-30c-5p对人前列腺癌细胞(LNCap)增殖、迁移和侵袭的影响,并阐明其可能的机制.方法:LNCap细胞根据转染质粒不同分为LNCap组(无转染质粒)、miR-30c-5p mimic组(转染miR-30c-5p mimic)、mimic NC组(转染miR-30c-5p mimic NC)、sh-DNA损伤诱导转录因子 4(DDIT4)组(转染sh-DDIT4)、sh-NC组(转染sh-DDIT4 NC)、miR-30c-5p mimic+pc-DNA3.1-NC组(共转染miR-30c-5p mimic和pc DNA3.1-DDIT4空载质粒)和miR-30c-5p mimic+pc-DNA3.1-DDIT4 组(共转 染 miR-30c-5p mimic 和 pc-DNA3.1-DDIT4 过 表 达 质 粒),RWPE-1细胞正常培养.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中miR-30c-5p和DDIT4 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中DDIT4 蛋白表达水平,CCK-8 法检测各组LNCap细胞增殖率,Transwell小室实验检测各组LNCap细胞侵袭细胞数,划痕实验检测各组LNCap细胞划痕愈合率,双荧光素酶报告基因实验验证miR-30c-5p与DDIT4的靶向关系.体内裸鼠成瘤实验,18只雄性BALB/c裸鼠随机分为空白组、agomiR-NC组(转染agomiR-30c-5p NC)和agomiR-30c-5p组(转染agomiR-30c-5p),每组 6只.agomiR-NC组和agomiR-30c-5p组裸鼠皮下注射LNCap细胞,空白组裸鼠注射等量生理盐水,检测各组小鼠肿瘤体积.HE染色观察各组小鼠前列腺癌组织形态表现,RT-qPCR法和免疫荧光染色法检测各组小鼠前列腺癌组织中miR-30c-5p和DDIT4 mRNA表达水平及DDIT4蛋白荧光强度.结果:体外前列腺癌细胞实验,与人正常前列腺上皮RWPE-1细胞比较,前列腺癌LNCap细胞中miR-30c-5p表达水平明显降低(P<0.01),DDIT4 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01);转染48 h后,与LNCap组和mimic NC组比较,miR-30c-5p mimic组LNCap细胞中miR-30c-5p表达水平明显升高(P<0.01).与LNCap组和sh-NC组比较,sh-DDIT4组LNCap细胞中DDIT4 mRNA表达水平明显降低(P<0.01);与miR-30c-5p mimic组和miR-30c-5p mimic+pcDNA3.1 NC组比较,miR-30c-5p mimic+pc-DNA3.1-DDIT4组LNCap细胞中miR-30c-5p表达水平明显降低(P<0.01);与miR-30c-5p mimic组和miR-30c-5p mimic+pcDNA3.1 NC组比较,miR-30c-5p mimic+pc-DNA3.1-DDIT4组LNCap细胞中DDIT4 mRNA表达水平明显升高(P<0.01);与 miR-30c-5p mimic组和 miR-30c-5p mimic+pcDNA3.1 NC组比较,miR-30c-5p mimic+pc-DNA3.1-DDIT4组LNCap细胞中DDIT4蛋白表达水平明显升高(P<0.05).CCK-8法检测,与LNCap组和mimic NC组比较,miR-30c-5p mimic组LNCap细胞增殖率明显降低(P<0.01);与LNCap组和 sh-NC组比较,sh-DDIT4 组LNCap细胞增殖率明显降低(P<0.01);与miR-30c-5p mimic 组和 miR-30c-5p mimic+pcDNA3.1 NC 组比较,miR-30c-5p mimic+pc-DNA3.1-DDIT4 组LNCap细胞增殖率明显升高(P<0.01).Transwell小室实验检测,与LNCap组和mimic NC组比较,miR-30c-5p mimic组LNCap细胞侵袭细胞数明显减少(P<0.01);与LNCap组和sh-NC组比较,sh-DDIT4 组LNCap细胞侵袭细胞数明显减少(P<0.01);与miR-30c-5p mimic组和miR-30c-5p mimic+pcDNA3.1 NC组比较,miR-30c-5p mimic+pc-DNA3.1-DDIT4组LNCap细胞侵袭细胞数明显增加(P<0.01).划痕实验检测,与LNCap组和mimic NC组比较,miR-30c-5p mimic组LNCap细胞划痕愈合率明显降低(P<0.01);与LNCap组和sh-NC组比较,sh-DDIT4组细胞划痕愈合率明显降低(P<0.01);与miR-30c-5p mimic组和miR-30c-5p mimic+pcDNA3.1 NC组比较,miR-30c-5p mimic+pc-DNA3.1-DDIT4组细胞划痕愈合率明显升高(P<0.01).双荧光素酶实验检测,与共转染WT-DDIT4和mimic NC的LNCap细胞比较,共转染WT-DDIT4和miR-30c-5p mimic的LNCap细胞中荧光素酶活性明显降低(P<0.01).体内裸鼠成瘤实验,细胞注射后第 3、6、9、12和 15天,与空白组和agomiR-NC组比较,agomiR-30c-5p组裸鼠肿瘤体积明显减小(P<0.05).HE染色观察,空白组和agomiR-NC组小鼠前列腺癌组织中细胞核增大,核仁突出且畸形;agomiR-30c-5p组小鼠前列腺癌组织部分区域细胞排列整齐,细胞核恢复正常形态.RT-qPCR法和免疫荧光染色法检测,与agomiR-NC组比较,agomiR-30c-5p组小鼠前列腺癌组织中miR-30c-5p表达水平明显升高(P<0.01);与空白组和agomiR-NC组比较,agomiR-30c-5p组小鼠前列腺癌组织中DDIT4 mRNA表达水平明显降低(P<0.01);DDIT4蛋白主要在细胞质表达,与空白组和agomiR-NC组比较,agomiR-30c-5p组小鼠前列腺癌组织中DDIT4蛋白荧光强度明显降低(P<0.01).结论:miR-30c-5p在前列腺癌LNCap细胞中表达水平明显降低,其可通过靶向下调DDIT4抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,从而参与前列腺癌的发生发展.

    前列腺肿瘤微小RNA-30c-5pDNA损伤诱导转录因子4细胞增殖细胞迁移

      原文链接:
    • 国家科技期刊平台
    • NETL
    • NSTL
    • 万方数据

    敲低RIP3对缺氧/复氧诱导人肾小管上皮HK2细胞自噬、细胞焦亡和铁死亡的影响

    何国斌王焕
    1644-1653页
    查看更多>>摘要：目的:探讨敲低受体相互作用蛋白激酶3(RIP3)对缺氧复氧(H/R)诱导下人肾小管上皮HK2细胞自噬、焦亡和铁死亡的影响.方法:将慢病毒干扰载体质粒shRIP3和阴性对照慢病毒干扰载体质粒shNC分别转染至HK2细胞中,分为shRIP3组和shNC组,另以正常培养未转染的HK2细胞作为空白组,转染48 h后,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法验证慢病毒转染效果.将HK2细胞分为对照组、H/R组、shNC+H/R组和shRIP3+H/R组.CCK-8法检测各组HK2细胞存活率,免疫荧光染色法检测各组细胞中微管结合蛋白1轻链(LC)3B和含核苷酸结合结构域富亮氨酸重复序列(NLR)家族Pyrin域蛋白3(NLRP3)蛋白荧光强度,Western blotting法检测各组HK2细胞中LC3Ⅱ、LC3Ⅰ、Beclin1、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-1、膜穿孔蛋白D(GSDMD)、白细胞介素(IL)-1β和IL-18 蛋白表达水平,试剂盒检测各组细胞中铁离子(Fe2+)水平.结果:与空白组和shNC组比较,shRIP3组HK2细胞中RIP3 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05).CCK-8法检测,与对照组比较,H/R组HK2细胞存活率明显降低(P<0.05);与H/R组比较,shRIP3+H/R组HK2细胞存活率明显升高(P<0.05).免疫荧光染色法检测,与对照组比较,H/R组HK2细胞中LC3B蛋白荧光强度明显降低(P<0.05),NLRP3蛋白荧光强度明显升高(P<0.05);与H/R组比较,shRIP3+H/R组HK2细胞中LC3B蛋白荧光强度明显升高(P<0.05),NLRP3蛋白荧光强度明显降低(P<0.05).Western blotting法检测,与对照组比较,H/R组HK2细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明显降低(P<0.05),Beclin1蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与H/R组比较,shRIP3+H/R组HK2细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明显升高(P<0.05),Beclin1蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与对照组比较,H/R组HK2细胞中Caspase-1、GSDMD、IL-1β和IL-18蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与H/R组比较,shRIP3+H/R组HK2细胞中Caspase-1、GSDMD、IL-1β和IL-18蛋白表达水平均明显降低(P<0.05).与对照组比较,H/R组HK2 细胞中GPX4 和SLC7A11蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);与H/R组比较,shRIP3+H/R组HK2细胞中GPX4和SLC7A11蛋白表达水平均明显升高(P<0.05).与对照组比较,H/R组HK2中细胞Fe2+水平明显升高(P<0.05);与H/R组比较,shRIP3+H/R组HK2细胞中Fe2+水平明显降低(P<0.05).结论:靶向敲低RIP3可诱导H/R诱导人肾小管上皮HK2细胞自噬,抑制细胞焦亡和减轻铁死亡.

    人肾小管上皮HK2细胞缺氧/复氧受体相互作用蛋白激酶3自噬焦亡铁死亡

      原文链接:
    • 国家科技期刊平台
    • NETL
    • NSTL
    • 万方数据

    扶正软坚抗癌方调控Akt/MDM2/P53信号通路对肝癌HepG2细胞恶性生物学行为的影响

    娄静赵雷朱岩洁袁帅强...
    1654-1663页
    查看更多>>摘要：目的:探讨扶正软坚抗癌方调控蛋白激酶B(Akt)/鼠双微体2(MDM2)/P53信号通路对肝癌HepG2细胞恶性生物学行为的影响.方法:采用 0、0.05、0.10、0.20、0.40、0.80、1.60、3.20和 6.40 g·mL-1 扶正软坚抗癌方分别处理HepG2细胞 48 h,CCK-8法检测HepG2细胞存活率,筛选扶正软坚抗癌方浓度用于后续实验.将HepG2 细胞分为对照组、低剂量扶正软坚抗癌方组(0.2 g·mL-1)、中剂量扶正软坚抗癌方组(0.4 g·mL-1)、高剂量扶正软坚抗癌方组(0.8 g·mL-1)、SC79 组(8 mg·L-1 SC79)和高剂量扶正软坚抗癌方+SC79 组(0.8 g·mL-1 扶正软坚抗癌方+8 mg·L-1 SC79).CCK-8法检测各组HepG2细胞增殖活性,克隆形成实验检测各组HepG2细胞克隆形成率,流式细胞术检测各组HepG2细胞凋亡率,Transwell小室实验检测各组HepG2细胞迁移和侵袭细胞数,Western blotting法检测各组HepG2细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化MDM2(p-MDM2)和P53蛋白表达水平.结果:随着扶正软坚抗癌方浓度(0、0.05、0.10、0.20、0.40、0.80、1.60、3.20 和 6.40 g·mL-1)的升高,HepG2 细胞存活率逐渐降低(P<0.05),选取 0.2、0.4和0.8 g·mL-1 扶正软坚抗癌方用于后续实验.CCK-8法检测,与对照组比较,低、中和高剂量扶正软坚抗癌方组HepG2细胞增殖活性均明显降低(P<0.05),并呈剂量依赖性,SC79组HepG2细胞增殖活性明显升高(P<0.05);与高剂量扶正软坚抗癌方组比较,高剂量扶正软坚抗癌方+SC79组HepG2细胞增殖活性明显升高(P<0.05).克隆形成实验检测,与对照组比较,低、中和高剂量扶正软坚抗癌方组HepG2细胞克隆形成率均明显降低(P<0.05),并呈剂量依赖性,SC79组HepG2细胞克隆形成率明显升高(P<0.05);与高剂量扶正软坚抗癌方组比较,高剂量扶正软坚抗癌方+SC79组HepG2细胞克隆形成率明显升高(P<0.05).流式细胞术检测,与对照组比较,低、中和高剂量扶正软坚抗癌方组HepG2细胞凋亡率均明显降低(P<0.05),并呈剂量依赖性,SC79组HepG2细胞凋亡率明显升高(P<0.05);与高剂量扶正软坚抗癌方组比较,高剂量扶正软坚抗癌方+SC79组HepG2细胞凋亡率明显升高(P<0.05).Transwell小室实验检测,与对照组比较,低、中和高剂量扶正软坚抗癌方组HepG2细胞迁移和侵袭细胞数均明显降低(P<0.05),并呈剂量依赖性,SC79组HepG2细胞迁移和侵袭细胞数均明显升高(P<0.05);与高剂量扶正软坚抗癌方组比较,高剂量扶正软坚抗癌方+SC79组HepG2细胞迁移和侵袭细胞数均明显升高(P<0.05).Western blotting法检测,与对照组比较,低、中和高剂量扶正软坚抗癌方组HepG2细胞中PCNA、MMP-2、MMP-9、p-Akt和p-MDM2蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),并呈剂量依赖性;Caspase-3和P53蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),并呈剂量依赖性;SC79组HepG2细胞中PCNA、MMP-2、MMP-9、p-Akt和p-MDM2 蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),Caspase-3 和P53 蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);与高剂量扶正软坚抗癌方组比较,高剂量扶正软坚抗癌方+SC79组HepG2细胞中PCNA、MMP-2、MMP-9、p-Akt和p-MDM2蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),Caspase-3和P53蛋白表达水平均明显降低(P<0.05).结论:扶正软坚抗癌方抑制HepG2细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,其作用机制与抑制Akt/MDM2信号通路、上调P53蛋白表达有关.

    扶正软坚抗癌方蛋白激酶B鼠双微体2P53肝肿瘤细胞增殖细胞凋亡

      原文链接:
    • 国家科技期刊平台
    • NETL
    • NSTL
    • 万方数据

    PDE1B表达与胃癌预后和肿瘤微环境的生物信息学分析

    杨希袁琴杨兰张文杰...
    1664-1676页
    查看更多>>摘要：目的:通过生物信息学方法筛选胃癌中具有差异预后意义的调节性细胞死亡和衰老基因,分析磷酸二酯酶1(PDE1)B对胃癌患者生存预后的影响.方法:自TCGA公共数据库下载胃癌基因表达数据和临床数据,本地数据库中随机抽取50例胃癌患者,收集其临床信息和石蜡样本,包括胃癌组织和癌旁正常组织.采用R软件"limma"程序包筛选差异表达基因(DEGs),单因素COX分析和Kaplan-Meier生存分析筛选有预测生存价值的DEGs,获取影响胃癌患者生存预后的交集基因,筛选与临床病理特征最具关联的基因PDE1B.TCGA数据库和Kaplan-Meier生存分析检测胃癌患者癌旁正常组织和胃癌组织中PDE1B mRNA表达水平及其与胃癌患者生存期的关系,采用基因本体论(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析 PDE1B生物学功能,CIBERSORT算法、肿瘤免疫数据库(TISIDB)和GSCA在线网站分析PDE1B与肿瘤微环境、免疫特征分子和药物敏感性的相关性.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测胃癌患者胃癌组织和癌旁正常组织中PDE1B mRNA表达水平.结果:共筛选 716 个DEGs,其中 505 个DEGs表达上调(P<0.05),211个DEGs表达下调(P<0.05),获得10个影响生存预后的交集基因,PDE1B mRNA表达水平与胃癌患者临床病理特征关系最为密切,其与年龄、肿瘤分级、肿瘤分期和肿瘤T、N及M期有关联(P<0.05);与G1-G2、Stage Ⅰ、T1-T2、N0和M0期胃癌患者比较,G3-G4、Stage Ⅱ-Ⅳ、T3-T4、N1-N3和M1分期胃癌患者胃癌组织中PDE1B mRNA表达水平均明显升高(P<0.05).与癌旁正常组织比较,胃癌患者胃癌组织中PDE1B mRNA表达水平明显降低(P<0.05);与PDE1B低表达胃癌患者比较,PDE1B高表达胃癌患者总体生存率明显降低(P<0.01).PDE1B表达、年龄和肿瘤分期是胃癌患者预后的危险因素(P<0.05).在调整了性别、年龄、肿瘤分级和肿瘤分期后,PDE1B表达是影响胃癌患者预后的独立危险因素(P<0.05).PDE1B主要富集于免疫球蛋白产生、钙离子转运、第二信使介导的信号转导等生物过程(BP),T淋巴细胞受体复合体、细胞膜信号受体复合体和含胶原蛋白的细胞外基质等细胞成分(CC),抗原结合、糖胺聚糖结合和细胞外基质结构成分等分子功能(MF);PDE1B主要参与了神经活性配体-受体相互作用、钙信号通路、环磷酸鸟苷(cGMP)-蛋白激酶G(PKG)信号通路及细胞因子-细胞因子受体的相互作用等途径.PDE1B与调节性T淋巴细胞(r=0.488)、髓源性抑制细胞(r=0.474)和巨噬细胞(r=0.617)呈正相关关系(P<0.01);与PDE1B低表达胃癌患者比较,PDE1B高表达胃癌患者促进肿瘤的调节性T淋巴细胞、单核细胞和M2型巨噬细胞浸润均明显增加(P<0.05).PDE1B mRNA表达水平与免疫抑制剂转化生长因子β(TGF-β)1(r=0.535)、集落刺激因子 1受体(CSF1R)(r=0.519)、免疫激活剂外核苷三磷酸二磷酸水解酶1(ENTPD1)(r=0.593)和CXC趋化因子配体12(CXCL12)(r=0.646)呈正相关关系(P<0.01).PDE1B高表达的胃癌组织对氟尿嘧啶(-0.3<r<-0.1)、甲氨蝶呤(-0.3<r<-0.1)和地西他滨(-0.3<r<-0.1)等药物较为敏感(P<0.05).与癌旁正常组织比较,胃癌患者胃癌组织中PDE1B mRNA表达水平明显降低(P<0.01);与PDE1B低表达胃癌患者比较,PDE1B高表达胃癌患者总体生存率明显降低(P<0.05);与T1-T2期胃癌患者比较,肿瘤T3-T4期胃癌患者胃癌组织中PDE1B mRNA表达水平明显升高(P<0.01).结论:PDE1B是胃癌患者预后的独立危险因素,可作为胃癌预后不良的有效指标.

    胃肿瘤生存预后磷酸二酯酶1B肿瘤微环境药物敏感性

      原文链接:
    • 国家科技期刊平台
    • NETL
    • NSTL
    • 万方数据