查看更多>>摘要:目的 探索核仁小RNA(snoRNA)SNORA72基因在不同癌症特别是结直肠癌(CRC)中的表达模式及其对CRC细胞的生长及放射敏感性的影响.方法 应用开放的癌症数据库分析SNORA72在不同癌症组织和CRC组织中的表达水平.构建过表达或敲低SNORA72的CRC细胞株HT29,将HT29细胞株分为过表达SNORA72组(LV-SNORA72)及其阴性对照组(LV-NC)、敲低SNORA72表达组(ASO-SNORA72)及其阴性对照组(ASO-NC).采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测HT29细胞中SNORA72表达情况.分别检测在体外过表达或敲低SNORA72后,对细胞增殖、细胞克隆形成、细胞凋亡、细胞周期的影响.对LV-SNORA72组及LV-NC组的HT29细胞进行不同剂量60Co γ射线照射,检测各组细胞的存活分数(SF)和凋亡率.采用转录组学分析法探讨SNORA72影响HT29细胞生长可能的作用机制.两组间的比较采用独立样本t检验.结果 癌症数据库分析发现SNORA72在包括CRC在内的多种癌症组织中高表达,且差异均有统计学意义(均P<0.05).qRT-PCR检测结果显示,与LV-NC组相比,LV-SNORA72组SNORA72的相对表达水平明显升高[(2.68±0.06)对(1.00± 0.17)],且差异有统计学意义(t=16.570,P<0.001).另外,与ASO-NC组相比,ASO-SNORA72组SNORA72的相对表达水平明显降低[(0.61±0.08)对(1.00±0.13)],且差异有统计学意义(t=4.355,P<0.05).细胞增殖检测结果显示,在实验的第3、4、5天,LV-SNORA72组的吸光度值明显高于 LV-NC 组[(0.79±0.05)对(0.51±0.09)、(1.78±0.04)对(1.22±0.05)、(3.30±0.05)对(2.19± 0.06)],且差异均有统计学意义(t=8.582、16.400、31.200,均 P<0.001).相反,ASO-SNORA72组的吸光度值明显低于 ASO-NC 组[(0.42±0.07)对(0.55±0.05)、(1.04±0.08)对(1.25±0.05)、(1.46± 0.09)对(1.74±0.08)],且差异均有统计学意义(t-=3.957、6.147、8.471,均P<0.01).细胞克隆形成实验结果显示,LV-SNORA72组的克隆形成率明显高于LV-NC组[(40.87±1.70)%对(26.60± 0.40)%],且差异有统计学意义(t=14.140,P<0.001).相反,ASO-SNORA72组的克隆形成率明显低于 ASO-NC 组[(9.60±0.40)%对(12.43±0.38)%],且差异有统计学意义(t=8.910,P<0.001).细胞凋亡检测结果显示,LV-SNORA72组的细胞凋亡率明显低于LV-NC组[(1.89±0.16)%对(2.64±0.15)%],且差异有统计学意义(t=6.115,P<0.01).相反,ASO-SNORA72组的细胞凋亡率明显高于ASO-NC组[(6.44±0.54)%对(3.92±0.37)%],且差异有统计学意义(t=6.644,P<0.01).Western blot结果显示,与ASO-NC组相比,ASO-SNORA72组可以促进凋亡蛋白PARP和Caspase3发生剪切活化,Bax蛋白表达水平升高,同时抑制抗凋亡蛋白Survivin和Bcl-2的表达.放射敏感性分析的细胞克隆形成实验结果显示,在经1、2、4、6Gyγ射线照射后,LV-SNORA72 组细胞的 SF 均较 LV-NC 组增加[(0.89±0.05)对(0.81±0.03)、(0.64±0.10)对(0.47± 0.01)、(0.16±0.04)对(0.09±0.01)、(0.04±0.01)对(0.02±0.01)],且差异均有统计学意义(t=4.063、8.802、4.045、2.937,均P<0.05).放射诱导的细胞凋亡结果显示,在4 Gy照射后48 h和72 h,与LV-NC组相比,LV-SNORA72组细胞凋亡率明显降低[(8.14±0.12)%对(9.86±0.22)%、(11.26±0.52)%对(15.83±1.54)%],且差异均有统计学意义(t=3.470、9.208,均 P<0.05);在 8 Gy照射后48 h和72 h,与LV-NC组相比,LV-SNORA72组细胞凋亡率明显降低[(13.29±0.17)%对(14.88±0.58)%、(19.82±0.56)%对(23.7±0.6)%],且差异均有统计学意义(t=3.201、7.819,均P<0.05);在12Gy照射后48h和72h,与LV-NC组相比,LV-SNORA72组细胞凋亡率明显降低[(14.06±0.32)%对(18.56±1.08)%、(22.19±0.02)%对(26.84±0.66)%],且差异均有统计学意义(t=9.054、9.369,均P<0.001).转录组学分析结果显示,SNORA72过表达影响细胞活化、细胞黏附、免疫和炎症反应,以及细胞迁移和增殖等生物学过程.结论 SNORA72在CRC组织中特异性高表达且与患者不良预后相关,过表达SNORA72促进CRC细胞的生长和增殖,增加细胞放射抵抗性.