查看更多>>摘要:目的 观察右美托咪定(Dex)对肾脏缺血再灌注(IR)的保护作用,探讨其机制是否通过激活α2受体/热休克蛋白70(HSP70)从而减轻NOD样受体相关蛋白3(NLRP3)介导的细胞焦亡.方法 SPF级C57/BL6雄性小鼠64只,8~10周龄,体重24~26 g,采用随机数字表法分为4组(每组16只):假手术组(Sham组)、肾IR组(IR组)、IR+Dex组、IR+Dex+阿替美唑(ATI)组(IR+Dex+ATI组).除Sham组外,其余组均夹闭双侧肾蒂45 min后恢复血流灌注48 h,建立肾IR损伤模型.IR+Dex组在夹闭肾蒂前30 min和松开夹子即刻腹腔注射Dex 50 μg/kg,IR+Dex+ATI组在给予Dex的同时腹腔注射ATI 250 μg/kg,其余组则腹腔注射等量的无菌生理盐水.再灌注48 h后收集小鼠血液和肾组织,采用全自动生化分析仪检测血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平以评估小鼠肾功能,苏木精-伊红染色(H-E染色)检测肾组织病理损伤及评分,免疫组化技术检测HSP70的表达,免疫印迹法(Western blot)检测HSP70、NLRP3、消皮素D(GSDMD)、胱天蛋白酶(caspase)-1、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、活化的胱天蛋白酶-1(cleaved caspase-1)、GSDMD蛋白N端片段(GSDMD-N)蛋白水平,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测HSP70、NLRP3、GSDMD、caspase-1、ASC、白细胞介素(IL)-1β、IL-18的mRNA水平.结果 与Sham组比较:IR组血清Cr、BUN 水平,肾损伤评分,HSP7 0 阳性率,HSP70、NLRP3、GSDMD、caspase-1、ASC、IL-1β、IL-18 的 mRNA 水平,HSP70、NLRP3、GSDMD、caspase-1、GSDMD-N、cleaved caspase-1 及 ASC蛋白水平较高(均P<0.05).与 IR组比较:IR+Dex组血清 Cr、BUN 水平,肾损伤评分,NLRP3、GSDMD、caspase-1、ASC、IL-1β、IL-18 的 mRNA 水平,NLRP3、GSDMD、caspase-1、GSDMD-N、cleaved caspase-1、ASC蛋白水平较低(均P<0.05);HSP70阳性率,HSP70的mRNA水平,HSP70蛋白水平较高(均P<0.05).与IR+Dex组比较:IR+Dex+ATI组血清 Cr、BUN水平,肾损伤评分,NLRP3、GSDMD、caspase-1、ASC、IL-1β、IL-18 的 mRNA水平,NLRP3、GSDMD、caspase-1、GSDMD-N、cleaved caspase-1、ASC 蛋白水平较高(均P<0.05);HSP70 阳性率,HSP70 的 mRNA水平,HSP70蛋白水平较低(均P<0.05).结论 Dex可减轻肾IR损伤,其机制可能与激活α2受体上调HSP70,从而抑制NLRP3炎症小体及焦亡级联反应相关.