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期刊信息/Journal information
南方农业学报
广西壮族自治区农业科学院
南方农业学报

广西壮族自治区农业科学院

李杨瑞

月刊

2095-1191

nfnyxb@163.com

0771-3243905、3244920

530007

广西南宁市大学东路174号

南方农业学报/Journal Journal of Southern AgricultureCSCD北大核心CSTPCD
查看更多>>本刊是由广西农业科学院主办的综合性农业科技期刊，主要报道农业科研新成果、新技术、新方法，农业生产新经验、新产业等。
正式出版
收录年代

    黄鳝卵原细胞移植研究

    何坤吴华东张士林刘铮铮...
    315-324页
    查看更多>>摘要：[目的]明确黄鳝卵原细胞是否能迁移、整合到斑马鱼生殖嵴上,为建立黄鳝异体生殖途径打下研究基础.[方法]通过酶消化法制备黄鳝卵原细胞悬液,经PKH26标记卵原细胞后显微注射到受体斑马鱼胚胎中,在荧光显微镜下追踪受体斑马鱼胚胎中供体黄鳝卵原细胞的迁移、整合及增殖情况;采用组织形态学方法检测移植受体斑马鱼胚胎的发育情况,并以半定量PCR和荧光原位杂交检测受体斑马鱼胚胎中供体黄鳝卵原细胞标记基因nanos3的表达情况.[结果]黄鳝卵巢经蛋白酶消化后,分离得到的卵原细胞悬液浓度为2.4×106个/mL,以PKH26染色后在红色荧光下呈橙黄色.荧光追踪观察结果显示,在移植后0、12、24和48 hpt的受体斑马鱼胚胎中均能检测到供体黄鳝卵原细胞,且黄鳝卵原细胞迁移至受体斑马鱼胚胎的生殖嵴上进行整合及增殖,但72 hpt受体斑马鱼出膜后荧光信号丢失.组织形态学观察结果表明,黄鳝卵原细胞注入受体斑马鱼胚胎中48 hpt后其细胞质结构松散,生殖细胞由动物极向两端迁移而分化形成组织,72 hpt和30 dpt的移植受体斑马鱼与对照组斑马鱼无明显差别.半定量PCR检测结果显示,在48 hpt受体斑马鱼胚胎中能检测黄鳝nanos3基因表达,而在72 hpt和30 hpt受体斑马鱼中表达微弱.荧光原位杂交检测结果显示,48 hpt、72 hpt和30 dpt的移植受体斑马鱼均有黄鳝nanos3基因表达.[结论]黄鳝卵原细胞在48 hpt后仍存在于受体斑马鱼胚胎内,但72 hpt后在受体斑马鱼胚胎未检测到黄鳝卵原细胞,即黄鳝卵原细胞在斑马鱼受体中迁移并最终整合到生殖嵴上,但在斑马鱼出膜后无法继续存活.因此,为了提高黄鳝生殖细胞移植成功率应选择亲缘关系近的鱼种或构建性腺不育种质作为受体.

    黄鳝卵原细胞斑马鱼胚胎移植nanos3基因荧光追踪荧光原位杂交半定量PCR

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