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期刊信息/Journal information
南方农业学报
广西壮族自治区农业科学院
南方农业学报

广西壮族自治区农业科学院

李杨瑞

月刊

2095-1191

nfnyxb@163.com

0771-3243905、3244920

530007

广西南宁市大学东路174号

南方农业学报/Journal Journal of Southern AgricultureCSCD北大核心CSTPCD
查看更多>>本刊是由广西农业科学院主办的综合性农业科技期刊，主要报道农业科研新成果、新技术、新方法，农业生产新经验、新产业等。
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    SOCS1基因过表达对猪乳腺上皮细胞增殖和凋亡的影响

    毛同辉杨酸罗杰苏徵...
    207-216页
    查看更多>>摘要：[目的]明确细胞因子信号转导抑制因子1基因(SOCS1)过表达对乳腺发育关键信号通路(JAK/STAT)相关基因表达的影响，为揭示SOCS1基因调节猪乳腺上皮细胞增殖和凋亡的作用机制提供参考依据。[方法]构建SOCS1基因过表达载体pcDNA3。1-SOCS1和阴性对照载体pcDNA3。1-NC，分别转染猪乳腺上皮细胞，然后通过CCK-8检测细胞增殖情况，流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡情况，实时荧光定量PCR检测转染后JAK/STAT信号通路相关基因的表达变化。[结果]以过表达载体pcDNA3。1-SOCS1和阴性对照载体pcDNA3。1-NC分别转染猪乳腺上皮细胞，过表达载体pcDNA3。1-SOCS1转染组的SOCS1基因相对表达量极显著高于阴性对照载体pcDNA3。1-NC转染组(P＜0。01，下同);转染48和72 h后，过表达载体pcDNA3。1-SOCS1转染组猪乳腺上皮细胞的OD值极显著低于阴性对照载体pcDNA3。1-NC转染组，说明过表达载体pcDNA3。1-SOCS1能有效抑制猪乳腺上皮细胞的增殖能力;过表达载体pcDNA3。1-SOCS1转染组的细胞凋亡率[(36。15±0。92)％]显著高于阴性对照载体pcDNA3。1-NC转染组[(30。55± 0。35)％](P＜0。05，下同)，且过表达载体pcDNA3。1-SOCS1转染组中的G1期细胞比例极显著降低，而S期和G2期细胞比例显著升高。与阴性对照载体pcDNA3。1-NC转染组相比，除JAK2、STAT3和TYK2基因外，过表达载体pcDNA3。1-SOCS1转染组中的SOCS2、SOCS3、JAK1、STAT2、STAT5A、IL-6、PRLR、MCL1 和PIAS3等9个JAK/STAT信号通路相关基因的相对表达量均极显著升高。[结论]SOCS1基因过表达可抑制猪乳腺上皮细胞增殖及促进细胞凋亡，并影响JAK/STAT信号通路相关基因的表达变化，从而在猪的乳腺发生发育调控机制中发挥重要作用。

    猪乳腺上皮细胞SOCS1基因细胞增殖细胞凋亡JAK/STAT信号通路

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    猴痘病毒B20R蛋白原核表达及其多克隆抗体的制备

    杨领弟李小梅芦晓鸥彭棋...
    217-225页
    查看更多>>摘要：[目的]构建猴痘病毒B20R蛋白原核表达系统，并评价原核表达获得的融合蛋白免疫原性，为后续的猴痘病毒检测及新型治疗方法开发提供技术支撑。[方法]参照GenBank已公布的猴痘病毒基因组序列，按照大肠杆菌密码子偏好性对B20R基因DNA序列进行优化，人工合成B20R基因并将其分别克隆至表达载体pET-28a和pET-32a以构建原核表达载体;以构建的2种原核表达载体分别转化大肠杆菌BL21感受态细胞，经IPTG诱导表达后使用SDS-PAGE和Western blotting检测融合蛋白B20R的表达情况。通过控制变量法优化融合蛋白B20R的诱导表达条件，使用Ni柱亲和层析进行纯化;以纯化的融合蛋白B20R经腹腔注射免疫昆明小鼠，定期采集昆明小鼠血样，采用ELISA检测血清抗体效价。[结果]将B20R基因克隆至表达载体pET-32a能成功构建原核表达载体pET-32a-B20R，经IPTG诱导后，可在大肠杆菌BL21感受态细胞中表达出融合蛋白B20R，且主要以不可溶的包涵体形式进行表达。融合蛋白B20R最佳诱导表达条件为37 ℃下以0。6 mmol/L IPTG诱导12 h，Ni柱亲和层析纯化的最佳咪唑洗脱浓度为40 mmol/L。以纯化的融合蛋白B20R接种免疫昆明小鼠，可在短时间内引起昆明小鼠产生强烈的体液免疫，且至免疫第42 d仍然维持较高的抗体水平，抗体效价高达1∶409600。[结论]构建的猴痘病毒B20R蛋白原核表达载体可在大肠杆菌BL21细胞中以包涵体形式成功表达出融合蛋白B20R，且融合蛋白B20R具有良好的免疫原性，可在短时间内引起昆明小鼠产生强烈的体液免疫。

    猴痘病毒B20R蛋白原核表达免疫原性抗体效价

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    赤水乌骨鸡ADSL基因的组织表达特征及其干扰载体构建

    余欢王成栋李辉陈友波...
    226-234页
    查看更多>>摘要：[目的]探究赤水乌骨鸡胸肌组织中腺苷琥珀酸裂解酶基因(ADSL)表达特征及其目的基因的干扰载体构建，为深入研究畜禽组织肌肉中肌苷酸(IMP)的表达规律及ADSL基因影响畜禽风味的机制提供理论参考。[方法]以不同月龄(3、4、5和6月龄)的赤水乌骨鸡(公鸡和母鸡各半)为试验材料，运用实时荧光定量PCR检测不同月龄及不同性别赤水乌骨鸡胸肌组织中ADSL基因的表达情况;同时根据GenBank中鸡ADSL基因mRNA序列(NM 205529。2)设计4对短发夹RNA(shRNA)干扰序列(sh1-ADSL、sh2-ADSL、sh3-ADSL和sh4-ADSL)和1对阴性对照序列(sh-NC)与pGPH1/GFP/Neo载体连接后进行测序，将构建成功的ADSL基因干扰载体转染至成肌细胞，检测并筛选出干扰效率最高的干扰载体。[结果]ADSL基因在不同月龄赤水乌骨鸡胸肌组织中的相对表达量排序为5月龄＞4月龄＞6月龄＞3月龄，赤水乌骨母鸡3月龄母鸡的ADSL基因相对表达量极显著高于公鸡(P＜0。01，下同)，4月龄母鸡ADSL基因的相对表达量显著高于公鸡(P＜0。05)，6月龄母鸡ADSL基因的相对表达量极显著低于公鸡;ADSL基因质粒的测序结果显示干扰质粒构建成功，质粒转染后干扰组及阴性对照均可见绿色荧光，空白对照不发光，说明各重组质粒成功转染赤水乌骨鸡成肌细胞;ADSL基因沉默结果显示，sh2-ADSL沉默效果最佳，干扰效率为90。30％。[结论]赤水乌骨鸡胸肌中ADSL基因的相对表达量随着月龄增加表现为先上升后下降的变化趋势;3、4和5月龄赤水乌骨母鸡ADSL基因的相对表达量高于公鸡，随着月龄增加ADSL基因的相对表达量增加，公鸡和母鸡间的差异减小。成功分离提取赤水乌骨鸡成肌细胞，并筛选出RNA干扰效果最佳载体sh2-ADSL，为后续研究ADSL基因调控鸡肉肌苷酸及风味的分子机制提供参考。

    赤水乌骨鸡ADSL基因组织表达成肌细胞干扰载体肉质风味

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    色瓦绵羊GPIHBP1基因克隆及其组织表达特征分析

    潘君茹李蕊张馨仁青措姆...
    235-242页
    查看更多>>摘要：[目的]克隆色瓦绵羊乳腺组织糖基化磷脂酰肌醇锚定高密度脂蛋白结合蛋白1基因(GPIHBP1)，明确其生物信息学特性及组织表达分布特征，为揭示GPIHBP1基因影响绵羊产奶性状的作用机制提供参考依据。[方法]克隆色瓦绵羊GPIHBP1基因编码区(CDS)序列，通过ProtPara、ProtScale、SOPMA、SWISS-MODEL、TMHMM-2。0等在线软件进行生物信息学分析，并以实时荧光定量PCR检测该基因在色瓦绵羊乳腺、肌肉、心脏、肾脏、肝脏、小肠、瘤胃和卵巢等8个组织中的表达情况。[结果]色瓦绵羊GPIHBP1基因CDS序列长519 bp，共编码172个氨基酸残基，与山羊GPIHBP1氨基酸序列(XM 018058666。1)比对，有4处氨基酸发生突变(32A→P、52V→A、130S→N和170M→V);色瓦绵羊GPIHBP1蛋白分子量为18063。87 Da，理论等电点(pI)为4。29，不存在跨膜螺旋结构，但存在信号肽(位于第20～21位氨基酸处)，是一种细胞外的酸性亲水性蛋白。色瓦绵羊GPIHBP 1蛋白存在12个磷酸化位点(6个丝氨酸磷酸化位点，5个苏氨酸磷酸化位点，1个酪氨酸磷酸化位点)，其二级结构以无规则卷曲状态(占55。07％)为主，其次是α-螺旋(占35。47％)，延伸链、β-转角分别占5。81％和4。65％。GPIHBP1基因在色瓦绵羊乳腺、肌肉、心脏、肾脏、肝脏、小肠、瘤胃和卵巢等8个组织中均有表达，以乳腺中的相对表达量最高，其次是心脏和肝脏，均极显著高于肌肉中的相对表达量(P＜0。01)。[结论]GPIHBP1基因在色瓦绵羊不同组织中均有表达，且以乳腺中的相对表达量最高，可能与乳脂相关基因表达的增减有关，其中，GPIHBP 1基因与LPL基因共同作用而参与绵羊泌乳调控。

    色瓦绵羊GPIHBP1基因乳腺产奶性状泌乳调控

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    广西H9N2亚型禽流感病毒疫苗候选株的筛选

    李孟谢芝勋李丹徐倩...
    243-252页
    查看更多>>摘要：[目的]筛选出免疫原性更优的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)疫苗候选株用于新型疫苗研发，为加强对H9N2亚型AIV的防控提供技术支持。[方法]以2000-2020年广西地区分离获得的36株H9N2亚型AIV分离株为试验材料，依据HA基因遗传进化分析选择12株不同年份、不同地域及不同宿主来源的H9N2亚型AIV代表株，与目前使用的商品化H9亚型AIV疫苗株(SS株)进行交叉血凝抑制试验(HI)及抗原性分析，根据抗原分析结果选择其中具有不同抗原差异的代表株制备油乳剂灭活疫苗，并分别与商品化H9亚型AIV疫苗(SS株)进行交叉免疫保护试验。[结果]在36株H9N2亚型AIV广西分离株中有31株属于Y280-Like(9。4。1)，其中26株属于分支1、5株属于分支Ⅱ，另外5株属于G1-Like(h9。4。1)，与我国常用疫苗株分属于不同进化分支。12株H9N2亚型AIV广西代表性分离株灭活后的HA效价≥7 log2，病毒灭活效果良好，可用于制备油乳剂灭活疫苗，且制备的油乳剂灭活疫苗稳定性和安全性良好。根据交互HI抗体滴度计算出各毒株间的抗原相关值(R)，结果发现A/chicken/Guangxi/C227/2015(H9N2)株(简称C227株)与其他毒株的抗原性无明显差异，对应的R在0。72～0。93间波动;疫苗交叉保护试验结果也表明，C227株制备的油乳剂灭活疫苗对不同毒株的免疫保护率均高于80％，且免疫保护效果优于A/chicken/Guangxi/CX/2013(H9N2)株(简称CX13株)，说明C227株更适合作为H9N2亚型AIV灭活疫苗的候选株。[结论]基于抗原性分析和免疫原性测定筛选出的A/chicken/Guangxi/C227/2015(H9N2)株对广西地区绝大部分H9N2亚型AIV流行株的免疫保护效果良好，可作为疫苗候选株用于研制新型H9N2亚型AIV疫苗。

    禽流感病毒(AIV)H9N2亚型油乳灭活疫苗抗原相关性疫苗交叉保护

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    狂犬病病毒GX074株P-MS20F突变体构建及其生长特性鉴定

    彭璟李文芳陆丽莹韦显凯...
    253-262页
    查看更多>>摘要：[目的]明确狂犬病病毒(RABV)强毒株GX074的P蛋白和M蛋白第20位苯丙氨酸(Phe)替换至弱毒株rRC-HL的重组突变体在宿主细胞内的生长特性，为P蛋白和M蛋白转录复制机理研究提供理论依据。[方法]运用反向遗传技术以强毒株GX074的M蛋白第20位Phe替换弱毒株rRC-HL(GX074P)的M蛋白第20位丝氨酸(Ser)，构建rRC-HL(GX074P-MS20F)突变体感染性cDNA克隆并拯救病毒。以重组突变体感染BSR/T7-9细胞，进行多步生长曲线测定，比较重组突变体与亲本毒株的生长能力，采用Western blotting检测N蛋白、P蛋白和M蛋白相对表达水平，利用实时荧光定量PCR检测N基因、P基因和M基因的相对表达量。[结果]经RT-PCR和测序鉴定，拯救的突变体rRC-HL(GX074P-MS20F)M蛋白第20位Ser成功替换为Phe。多步生长曲线测定结果显示，构建的重组突变体在感染24、48、72和96 h后，病毒滴度均高于亲本弱毒株rRC-HL和对照弱毒株rRC-HL(GX074PM1)，平均约为亲本弱毒株rRC-HL的10倍。在蛋白表达水平上，rRC-HL(GX074P-MS20F)毒株在感染48 h后，N蛋白和M蛋白相对表达水平均极显著高于亲本弱毒株rRC-HL(P＜0。01)，说明强毒株GX074的P蛋白联合M蛋白第20位Phe替换至弱毒株rRC-HL后，增加了突变体N蛋白和M蛋白表达。感染24和48 h后，rRC-HL(GX074P-MS20F)毒株N基因、P基因和M基因的相对表达量均高于亲本弱毒株rRC-HL和对照弱毒株rRC-HL(GX074PM1)。[结论]强毒株GX074的M蛋白第20位Phe替换可提高病毒的增殖能力，同时增强病毒的复制与转录能力，M蛋白第20位Phe可能是影响病毒复制和转录的关键位点。

    狂犬病病毒(RABV)P蛋白M蛋白生长特性反向遗传

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    马链球菌兽疫亚种表面蛋白FIPP的免疫效力评价

    郭政李亚娟林永进黄坚仪...
    263-271页
    查看更多>>摘要：[目的]评价马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi ssp。zooepidemicus，SEZ)表面蛋白FIPP(纤维蛋白原和Ig结合蛋白前体)的免疫效力，为预防SEZ感染提供新的候选疫苗抗原。[方法]根据NCBI数据库公布的FIPP基因序列设计引物进行PCR扩增，将扩增片段克隆到原核表达载体pCold Ⅰ，并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，FIPP蛋白通过IPTG诱导在大肠杆菌中表达及纯化，以SDS-PAGE进行鉴定。纯化后的重组蛋白FIPP(rFIPP)对BALB/c小鼠进行免疫，二免14 d后对小鼠进行免疫保护试验并采集血清;解剖感染SEZ小鼠的肝脏、脾脏和肺脏进行病理组织学观察。以酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测小鼠血清中的特异性抗体IgG水平，以蛋白质印迹(Wes-tern blotting)方法检测重组蛋白的反应原性，通过全血杀菌试验检测血清的杀菌活性。[结果]通过SDS-PAGE电泳可观察到约96 kD的蛋白片段，与FIPP蛋白的理论分子量相符。重组蛋白rFIPP免疫小鼠后对SEZ攻击的保护率达70。0％。ELISA方法检测结果表明，重组蛋白rFIPP免疫小鼠后可诱导产生特异性抗体免疫球蛋白G(IgG)，且极显著高于阴性对照(P＜0。01，下同)，通过IgG亚型分析，发现IgG1的抗体水平显著高于IgG2a(P＜0。05)，说明重组蛋白rFIPP免疫后产生的抗体亚型以IgG1为主。全血杀菌试验结果表明，重组蛋白rFIPP超免血清对SEZ具有极显著杀灭作用。组织病理学观察结果显示，重组蛋白rFIPP免疫后能有效减弱小鼠各类器官的病理损伤。[结论]经表达纯化的重组蛋白rFIPP在小鼠感染SEZ模型中具有良好的免疫保护效力，可用作制备SEZ亚单位疫苗的有效候选抗原。

    马链球菌兽疫亚种FIPP蛋白免疫保护评价

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    11种代表性农药不同污染传导方式对家蚕的毒害性比较

    陆方苗梁文耸陆芳焘盘柳桂...
    272-279页
    查看更多>>摘要：[目的]明确11种代表性农药在桑树上的内吸和传导性能及其熏蒸触杀对家蚕的毒害性，为有效防控养蚕生产中的家蚕农药中毒提供科学依据。[方法]以家蚕作为标志物，从六大类农药中选择11种代表性农药制剂，通过根部灌注和叶面喷雾方式处理桑树，分别于药后第3、30和120 d采摘桑叶饲喂三龄和五龄起蚕，观察家蚕的中毒症状，分析判断各种农药在桑树上的污染传导方式;同时利用熏蒸触杀方式直接处理家蚕，综合判断各种农药对家蚕熏蒸触杀的毒害性。[结果]不同农药导致的家蚕中毒症状表现出多种相似特征，如拒食、吐液、体缩及蚕体蜷曲呈C形或S形等。不同农药灌根后第3和30 d的桑叶均可引起家蚕中毒，说明这11种农药均具有通过桑树根内吸并向上传导的性能，且杀虫双、杀虫单、高效氯氰菊酯、噻虫嗪、吡虫啉、吡丙醚和氯虫苯甲酰胺等7种农药在桑树伐条后的新生桑叶中仍具有很强的残留毒性。11种农药喷雾后第3 d的桑叶均可使家蚕出现中毒症状;至喷雾后第30 d，除敌百虫和敌敌畏外，其他9种农药喷雾的桑叶还能引起家蚕出现中毒症状;到喷雾后第120 d只有以氯虫苯甲酰胺和阿维菌素喷雾的桑叶能引发家蚕中毒，即这2种农药的有害成分对桑树具有双向传导特性。11种农药对家蚕熏蒸触杀的毒害性存在明显差异，具体排序为敌敌畏＞高效氯氰菊酯=联苯菊酯＞噻虫嗪＞吡虫啉＞敌百虫＞杀虫双＞杀虫单＞阿维菌素＞氯虫苯甲酰胺＞吡丙醚。[结论]11种农药对桑树根、桑叶均具有内吸性和向上传导性，且氯虫苯甲酰胺和阿维菌素对桑树具有双向传导特性;各种农药对家蚕熏蒸触杀的毒害性存在明显差异，以吡丙醚、氯虫苯甲酰胺和阿维菌素的熏蒸触杀毒害性较弱。可见，11种农药在3种传导方式(灌根、叶面喷雾和熏蒸触杀)中有不同的传导效率，各具优势传导方式。

    家蚕桑树农药污染传导毒害性

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    热水浴法解除蚕卵滞育的条件优化及应用效果分析

    孙溱博廖森泰杨琼刘吉平...
    280-289页
    查看更多>>摘要：[目的]通过Box-Behnken响应面优化热水浴法解除蚕卵滞育的处理条件，并测试以不同来源水处理蚕种的孵化效果，为热水浴法在蚕业生产中的推广应用提供科学依据，探索出可替代传统盐酸孵化法且更安全环保、成本低廉的蚕种人工孵化方法。[方法]选用两广二号为供试蚕种，以卵龄(A)、处理时间(B)和处理温度(C)为变量，以蚕卵实用孵化率(Y)为响应值，通过Box-Behnken响应面优化热水浴法解除蚕卵滞育的处理条件;选择自来水、纯净水及矿泉水等不同来源的水，并选取萨尼斯、932、湘晖和春5等4个蚕种品种，分别采用优化后的条件对蚕卵进行热水浴处理，检验热水浴法解除蚕卵滞育的效果。[结果]蚕卵实用孵化率对3个变量因素的二项式拟合方程为:Y=91。03-2。01A-4。60B+22。89C+0。040AB+4。03AC+0。89BC-10。46A2+3。25B2-19。60C2，响应面设计模型拟合程度较好。各因素对蚕卵实用孵化率的影响排序为处理温度(C)＞处理时间(B)＞卵龄(A)，其中，处理温度影响极显著(P＜0。01)，处理时间影响显著(P＜0。05，下同)，卵龄影响不显著(P＞0。05，下同);两因素间交互作用对蚕卵实用孵化率的影响排序为AC＞BC＞AB。修正后的热水浴法最佳处理条件:卵龄17。5 h，处理时间13 s，处理温度50 ℃，此条件下的实际蚕卵实用孵化率为97。94％，与理论预测值(98。81％)接近。不同来源水对两广二号正、反交种进行热水浴处理后的实用孵化率均在95。00％以上，仅阳山自来水和纯净水1在热水浴处理两广二号正交种时的实用孵化率显著低于盐酸即时浸酸法，但其实用孵化率仍高于93。00％;萨尼斯、932、湘晖、春5等4个家蚕品种的热水浴实用孵化率与盐酸即时浸酸法相比均无显著差异，表明热水浴法具有较强的普适性。[结论]热水浴法能有效解除蚕卵滞育，具有较强的普适性，且成本低廉、操作简单，可作为蚕业生产上替代传统盐酸孵化法的新方法。

    热水浴法二化性家蚕品种蚕卵解除滞育人工孵化响应面优化

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    邻甲酚对斑马鱼成鱼急性毒性及组织显微结构的影响

    宋兴超江倩倩甘真博梁正其...
    290-298页
    查看更多>>摘要：[目的]明确邻甲酚对斑马鱼成鱼的急性毒性及其对肌肉、鳃和肝脏组织显微结构的影响，为邻甲酚对斑马鱼毒性效应的分子机理研究与环境安全评价和生态风险评估提供理论依据。[方法]采用静水式方法，将斑马鱼成鱼分为6组，暴露于0(对照)、15。00、19。74、25。98、34。19和45。00 mg/L邻甲酚溶液中，记录染毒24、48、72和96 h的各组斑马鱼中毒症状和死亡尾数，计算死亡率、半致死浓度(LC50)和安全浓度(SC)，并进行安全性评价，采用组织病理学技术分析不同浓度邻甲酚对斑马鱼肌肉、鳃和肝脏组织显微结构的影响。[结果]与对照组相比，45。00 mg/L(最高浓度)组斑马鱼急性中毒症状表现为呼吸困难、狂游、抽搐、轻微侧翻且对外周刺激反应迟钝，逐渐失去平衡而静卧水底，24 h内全部死亡。邻甲酚对斑马鱼成鱼24、48、72和96 h的LC50分别为34。721、30。079、27。123和27。092 mg/L，SC为6。612 mg/L，毒性等级为低毒。组织病理学分析表明，15。00和19。74 mg/L组斑马鱼染毒96 h后，肌肉、鳃和肝脏组织显微结构无明显变化。邻甲酚浓度达34。19和45。00 mg/L时，斑马鱼肌肉组织的肌纤维逐渐断裂、肿胀和坏死;鳃组织中鳃小片末端肿大出血，上皮细胞肿胀、脱落和损伤，红细胞数量明显增多，细胞排列混乱;肝脏出现大面积细胞空泡化，肝细胞核萎缩变形、溶解或偏移，导致肝细胞呈坏死状态。[结论]邻甲酚对斑马鱼成鱼的毒性效应随着暴露浓度升高、时间延长而增强，属于低毒性酚类污染物。高浓度邻甲酚暴露可导致斑马鱼成鱼肌肉、鳃和肝脏组织显微结严重损伤。

    斑马鱼邻甲酚急性毒性半致死浓度显微结构

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