查看更多>>摘要：目的 探讨穿心莲内酯对慢性低灌注所致脑损伤的治疗效果及其作用机制.方法 (1)动物实验.将40只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、造模组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,每组8只.对造模组和3个不同剂量组大鼠采用双侧颈总动脉结扎法永久结扎双侧颈总动脉,假手术组仅行假手术.造模后28 d,给予低剂量组大鼠灌胃20 mg/kg穿心莲内酯,中剂量组大鼠灌胃40 mg/kg穿心莲内酯,高剂量组大鼠灌胃80 mg/kg穿心莲内酯,假手术组和造模组灌胃等体积生理盐水,1次/d,持续14 d.(2)细胞实验.将细胞分为对照组、造模组、1 µmol/L穿心莲内酯组、2 µmol/L穿心莲内酯组和4 μmol/L穿心莲内酯组.各穿心莲内酯干预组给予相应浓度的穿心莲内酯干预,对照组、造模组加入等体积完全培养基.干预24 h后,除对照组外,将其余4组细胞置入密闭的缺氧小室中进行氧糖剥夺法造模6 h.(3)通过水迷宫和旷场实验进行动物行为学检测评估大鼠的学习记忆功能;取大鼠脑组织进行HE染色和Nissl染色观察脑组织神经细胞的病理状态;采用ELISA试剂盒检测大鼠脑组织炎症因子表达量;使用CCK-8和Hoechst染色检测并观察HT22细胞活性状态;采用Western blot检测细胞和大鼠脑组织核因子κB(NF-κB)通路相关蛋白的表达.结果 (1)动物实验.与假手术组相比,造模组逃避潜伏期和第1次穿越平台时间增加,穿越平台次数、直立次数和穿越格子数减少;与造模组相比,3个剂量组大鼠逃避潜伏期、第1次穿越平台时间缩短,穿越平台次数增加(P＜0.05).造模组大鼠海马区和皮质区神经元排列紊乱,细胞质萎缩,核仁碎裂;3个剂量组大鼠海马区和皮质区神经元损伤程度较造模组减轻.与假手术组相比,造模组大鼠海马区和皮质区神经元内Nissl小体明显减少,神经元受损;3个剂量组大鼠神经元内Nissl小体数量较造模组增加,损伤神经元数量较造模组减少.与假手术组相比,造模组大鼠白细胞介素(IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α表达水平上升,IL-10表达水平下降;与造模组相比,低剂量组、中剂量组IL-1β和TNF-α表达水平下降,IL-10表达水平升高,中剂量组IL-6表达水平亦下降,而高剂量组仅IL-10表达水平升高(P＜0.05).与假手术组相比,造模组大鼠磷酸化IκBα和磷酸化p65表达水平增加;与造模组相比,3个剂量组磷酸化IκBα和磷酸化p65表达水平均下降,但随剂量的增加,磷酸化p65表达水平依次降低,磷酸化IκBα表达水平则依次升高(P＜0.05).(2)细胞实验.与对照组相比,造模组细胞活性降低;与造模组比较,2 μmol/L穿心莲内酯组和4 μmol/L穿心莲内酯组细胞活性增加.与对照组相比,造模组细胞磷酸化p65蛋白表达水平增加;与造模组相比,3个穿心莲内酯干预组细胞磷酸化p65表达水平均下降(P＜0.05).结论 穿心莲内酯可以改善低灌注大鼠的认知功能和自主运动能力障碍,缓解焦虑状态,机制可能与抑制NF-κB通路激活、调控炎症因子的表达有关.
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