查看更多>>摘要:目的:分析Cofilin-1在肝癌组织中的表达状态和侵袭性效应,探讨Cofilin-1表达与肝癌侵袭转移的相关性,明确Cofilin-1在肝癌细胞侵袭性生长的信息转导途径中的作用及其分子机制.方法:采用免疫组化染色和实时定量PCR方法检测Cofilin-1和表皮生长因子受体Ⅲ(Epidermal growth factor receptorⅢ,EGFRvⅢ)在肝癌组织中的表达;将EGFRvⅢ的基因导入Huh-7细胞中,构建Huh-7-EGFRvⅢ细胞系,采用特异性Cofilin-1-siRNA的基因表达沉默法抑制Huh-7-EGFRvⅢ 肝癌细胞内源性Cofilin-1的表达及活性,实验分Cofilin-1-siRNA组(Cofilin-1-siRNA转染Huh-7-EGFRvⅢ细胞)、非特异性-RNA组(Ctrl-siRNA组,非特异性siRNA转染Huh-7-EGFRvⅢ细胞)、未转染组(未转染Huh-7-EGFRvⅢ细胞),每组设2个平行孔.免疫组化法鉴定Cofilin-1蛋白在各组间水平变化,同时采用细胞迁移及体外侵袭实验观察转染后细胞的侵袭能力变化.结果:与癌旁组织相比,肝癌组织中Cofilin-1基因表达明显增强[(0.436±0.124)vs(4.392±0.327),t=2.130,P<0.05],EGFRvⅢ基因表达也明显增强[(0.835±0.021)vs(3.766±0.257),t=1.645,P<0.05];Cofilin-1-siRNA组Cofilin-1的蛋白量为(0.395±0.036),显著低于Ctrl-siRNA组(1.367±0.139)和未转染组(1.328±0.087),差异有统计学意义(t1=26.315,P1<0.01;t2=24.376,P2<0.01),Ctrl-siRNA组与未转染组间差异无统计学意义(t=0.067,P=0.561);体外细胞迁移及侵袭实验结果也都显示:与Ctrl-siRNA组和未转染组比较,Cofilin-1-siRNA组迁移及侵袭细胞数量明显降低,Cofilin-1-siRNA组穿膜细胞数[(69.28±2.06)个]显著低于Ctrl-siRNA组[(87.64.28±1.15)个]和未转染组[(84.35±1.73)],差异有统计学意义(t=13.87,P<0.05).结论:Cofilin-1和EGFRvⅢ在肝癌组织中高表达,下调Cofilin-1基因表达能抑制肝癌细胞株Huh-7-EGFRvⅢ的侵袭能力和转移能力.