查看更多>>摘要:目的 探讨基因沉默诱导型环氧化酶(cyclooxygenase-2,COX-2)联合高压氧(hyperbaric oxygen,HBO)对脑出血大鼠神经细胞水肿、凋亡、自噬及神经功能修复影响.方法 SPF级成年雄性SD大鼠(n=96),立体定向下于尾状核注射凝血酶Ⅶ构建脑出血模型.采用随机数字法分为4组(n=24/组):对照组、HBO组、COX-2 RNAi组及联合组.构建靶向沉默COX-2基因表达的siRNA质粒.大鼠分组治疗后,每组再随机抽取4只大鼠用于每类项目检测.术后第1、7、14天采用神经功能缺损评分(modified neurological severity score,mNSS评分)评估.术后第7天,干/湿比重法检测脑组织含水量;Evans法检测血脑屏障通透性;Annexin V法及TUNEL法检测神经细胞凋亡率;RT-PCR法检测脑组织COX-2的mRNA表达水平;免疫蛋白印迹法(western blot,WB)检测自噬相关蛋白Beclin-1、COX-2、水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP-4)、B 细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia,Bcl-2)、半胱天冬酶-3(Caspase-3)、缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1,HIF-1α)、基质金属蛋白-2/9(matrix metalloproteinase-2/9,MMP-2/9)表达水平.采用SPSS软件对组间多样本行单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验.结果 SD大鼠脑出血模型、质粒构建均获成功.术后第7、14天,与对照组比较,COX-2 RNAi、HBO、联合组mNss评分均明显降低(均P<0.01),以联合组效果最优(P<0.01).术后第7天,与对照组比较,各治疗组脑组织含水量、血脑屏障通透性均明显降低(均P<0.05),以联合组降低最明显(P<0.01).神经细胞凋亡率各治疗组与对照组相比均有所下降(均P<0.05),以联合组下降最明显(P<0.01).COX-2 mRNA表达水平各治疗组均较对照组明显降低(均P<0.01),以联合组沉默COX-2表达最明显(P<0.05).WB结果显示,与对照组比较,各治疗组均能降低 Beclin-1、COX-2、AQP-4、Caspase-3、HIF-1α、MMP-2/9 蛋白表达(均P<0.05),而增加Bcl-2表达(均P<0.01),其中以联合组趋势最明显(P<0.01).结论 基因沉默COX-2协同高压氧可有效修复脑出血大鼠神经功能,其机制可能与降低血脑屏障通透性,减轻脑水肿,抑制神经细胞凋亡、自噬有关.