查看更多>>摘要:目的 基于液质联用技术对生知母-生黄柏、盐知母-盐黄柏药对水提液灌胃给药后大鼠入血成分分析,结合网络药理学预测盐炙在知母-黄柏药对治疗 2 型糖尿病的影响,并通过体外实验进行初步验证.方法 大鼠连续灌胃给药生知母-生黄柏药对、盐知母-盐黄柏药对水提液 2 次,中间间隔 1 h,末次给药 60 min后腹主动脉取血,用甲醇沉淀蛋白法处理后复溶,采用色谱柱Shim-pack GIST C18(4.6 mm×150 mm,5 μm);流动相A相为0.1%甲酸水,B相为0.1%甲酸-乙腈;梯度洗脱,正、负离子全扫描模式,质量扫描范围m/z 100~1 500.结合数据库二级谱图及文献,分析鉴定生知母-生黄柏、盐知母-盐黄柏药对的入血成分.检索 2 型糖尿病疾病靶点,对入血成分和疾病的交集靶点进行蛋白质互作网络分析、GO、KEGG通路富集分析,构建"入血成分-靶点"网络图,运用 AutoDock软件对筛选出的核心成分和核心靶点进行分子对接验证.验证实验以HepG2 细胞为实验对象,胰岛素联合高糖诱导胰岛素抵抗模型,CCK8 法检验盐炙前后知母-黄柏药对对细胞增殖影响,West-ern blot检测PI3K-AKT信号通路相关蛋白的表达情况.结果 生知母-生黄柏药对水提液大鼠血清中鉴定出 15 种原型成分,1 个芒果苷代谢成分.盐知母-盐黄柏药对水提液大鼠血清中鉴定出 17 个原型成分,1 个芒果苷代谢成分.盐炙后入血成分中芒果苷、小檗碱、3-异丁基戊二酸等成分含量较生品高.KEGG和GO结果显示,知母-黄柏药对治疗 2 型糖尿病可能与RNA聚合酶的转录调控、炎症反应、AGE-RAGE、PI3K-AKT、胰岛素抵抗等通路有关.细胞实验表明盐炙前后知母-黄柏药对可以上调p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、GLUT4 蛋白表达,且盐炙组效果优于生品组.结论 初步阐释了知母-黄柏药对盐炙前后入血成分,阿魏酸、小檗碱、小檗红碱、芒果苷与mTOR、SIRT1、EGFR、PPARA等可能是知母-黄柏药对盐炙后增强 2 型糖尿病治疗效果的主要成分和靶点,其机制可能是增强了PI3K-AKT等相关通路的作用,为知母-黄柏药对盐炙前后药效物质基础研究及临床应用提供重要参考.