查看更多>>摘要:目的 探讨左归降糖解郁方(ZJJF)对糖尿病并发抑郁症大鼠海马神经元凋亡的影响,并明确其作用机制是否与调控 JNK信号通路有关.方法 (1)将 72 只无特定病原体(SPF)级雄性 Sprague Dawley(SD)大鼠随机分为6组,每组12只:对照组、模型组、二甲双胍(0.18 g/kg)+氟西汀(1.8 mg/kg)组和ZJJF高(20.52 g/kg)、中(10.26 g/kg)、低(5.13 g/kg)剂量组.除对照组外,其余各组均采用单次尾静脉注射链脲佐菌素(STZ,38 mg/kg)联合 28 天慢性不可预见性温和应激(CUMS)的方法建立糖尿病并发抑郁症大鼠模型.于CUMS造模期间灌胃给药,对照组与模型组给予等体积蒸馏水,共给药 28 天.通过检测动物空腹血糖、胰岛素、糖化血红蛋白,并结合旷场实验(OFT)、强迫游泳实验(FST)和蔗糖偏好实验(SPT)评价ZJJF降糖与抗抑郁的功效,同时通过苏木素-伊红(HE)染色与末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)染色评价海马组织损伤与神经元凋亡情况,免疫印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3及JNK/Elk-1/c-fos信号的表达水平.(2)为进一步明确JNK信号在海马神经元凋亡及ZJJF药效中的作用,另取 50只SPF级雄性SD大鼠,随机分为 5 组,每组 10 只:对照组、模型组、SP600125(SP6,JNK阻断剂,10 mg/kg)组、ZJJF(20.52 g/kg)组、ZJJF(20.52 g/kg)+Anisomycin(Aniso,JNK激动剂,15 mg/kg)组.除对照组外,其余各组均建立糖尿病并发抑郁症大鼠模型,并在CUMS造模期间,灌胃给药ZJJF,腹腔注射给药SP6 和Aniso,持续 28 天.通过OFT、FST和SPT评价大鼠行为学变化,并通过HE染色、Nissl染色、TUNEL染色和电镜(TEM)观察海马神经元损伤与凋亡情况,检测各组大鼠海马组织中凋亡相关蛋白及JNK信号通路的变化.结果 (1)ZJJF显著降低模型大鼠的高血糖、胰岛素及糖化血红蛋白水平(P<0.01),增加自主活动水平并减少绝望样行为(P<0.01),改善海马神经元病理损伤,包括增加神经元胞核数量(P<0.01),减少机械细胞、空泡细胞及凋亡神经元数量(分别为P<0.05、P<0.01 和P<0.01),下调促凋亡蛋白Bax、caspase-3 表达(P<0.01),上调抗凋亡蛋白Bcl-2表达(P<0.01),显著抑制p-JNK、Elk-1和c-fos的高表达(P<0.01).(2)SP6 能够增加模型大鼠自主活动能力(P<0.05),降低绝望时间(P<0.05),但对蔗糖偏好度无显著影响(P>0.05),增加海马神经元尼氏小体数量(P<0.01),降低Bax、caspase-3 蛋白表达水平(分别为P<0.01 和P<0.05),减少神经元凋亡数量(P<0.05),增加 Bcl-2表达水平(P<0.01),抑制 p-JNK、Elk-1、c-fos的高表达(分别为 P<0.01、P<0.01和P<0.05),说明糖尿病并发抑郁症大鼠海马神经元凋亡与JNK信号的异常激活有关;与ZJJF组比较,ZJJF+Aniso组蔗糖偏好度减少(P<0.05),绝望时间增加(P<0.01),海马神经元损伤更加严重,Bcl-2表达水平降低(P<0.01),Bax、caspase-3、p-JNK、Elk-1 和c-fos蛋白表达水平升高(分别为P<0.01、P<0.05、P<0.05、P<0.01 和P<0.05),说明ZJJF抗抑郁、改善神经元凋亡及对JNK信号分子的调控作用均可被JNK激动剂所逆转.结论 ZJJF具有良好的降糖功效,并通过抑制JNK信号通路的激活减轻海马神经元的凋亡,是治疗糖尿病并发抑郁症的一种很有前景的药物.