查看更多>>摘要：目的 建立一种测定兔眼组织中加替沙星浓度的方法,并比较加替沙星眼用凝胶兔眼单次和多次点眼后在眼组织及血浆中的药代动力学特征.方法 取94只健康新西兰兔.任意选取10只新西兰兔不给予任何药物用于空白组织获取,将剩余84只按照随机数字表法随机分成单次给药组36只和多次给药组48只,雌雄各半,均取左眼为实验眼.单次给药组左眼给予1滴加替沙星眼用凝胶,分别于点眼后0.5、1、3、5、7、10 h收集泪液后进行心脏取血并处死,分别取房水、结膜、角膜、巩膜、虹膜-睫状体、晶状体、玻璃体、视网膜和脉络膜;多次给药组左眼每次给予1滴加替沙星眼用凝胶,每天3次,分别于连续给药第4和第6天首次给药后0.5 h,第7天首次给药后0.5、1、3、5、7、10h进行心脏取血和眼组织收集.采用甲醇沉淀蛋白法预处理各样本,采用高效液相色谱串联质谱法测定并计算实验兔血浆及眼组织中加替沙星的达峰浓度(Cmax)、达峰时间(Tmax)、曲线下面积(AUC)等药代动力学参数,流动相采用甲醇-0.1％乙酸水溶液(体积比=70∶30),采用正离子多反应检测模式,以环丙沙星为内标物,并参照《中国药典》(2020年版)9012生物样品定量分析方法验证指导原则对方法的选择性、标准曲线和定量下限、准确度和精密度、提取回收率和基质效应、稳定性进行验证.结合加替沙星对眼部常见感染菌的最小抑菌浓度(MIC90),计算各组织和血浆Cmax/MIC90和AUC/MIC90值.结果 加替沙星在各眼组织和血浆中线性关系良好;角膜组织中的日间准确度为-1.5％～6.0％,日间精密度≤15％;角膜组织中的提取回收率为92.0％～94.8％,经内标归一化计算得到的低、中、高浓度的基质效应精密度均不大于3.3％,单次给药后加替沙星在眼前节和后节组织均有较高的药物浓度分布,AUC0-t从高到低分别为泪液、角膜、结膜、虹膜-睫状体、巩膜、房水、脉络膜、视网膜、晶状体和玻璃体,Cmax分别为 94.90 μg/g、7.34μg/g、3.65 μg/g、1.81 μg/g、1.75 μg/g、1.31 μg/ml、0.86 μg/g、0.53 μg/g、0.13 μg/g、0.07 μg/ml,除晶状体、脉络膜和玻璃体液中的Tmax为0.5 h,其余各组织Tmax均为1 h.多次给药第4、6、7天的0.5 h各眼部组组织中加替沙星浓度比较,差异无统计学意义(P＞0.05),且角膜、结膜和巩膜中AUC0-t约为单次给药的2.04、2.12和2.32倍.单、多次给药后进入体循环的加替沙星浓度均低于25.00 ng/ml.对于金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌,加替沙星眼用凝胶连续用药后在眼前节结膜、角膜、巩膜、虹膜-睫状体、房水和脉络膜中的药代动力学/药效学均可满足Cmax/MIC90≥10且AUC/MIC90≥30.结论 成功构建快速灵敏的眼组织加替沙星浓度测量方法.加替沙星眼用凝胶以每天3次点眼连续用药3 d后眼组织可达到稳态浓度,且比单次给药在眼组织浓度升高.局部使用加替沙星眼用凝胶可实现眼部结膜、角膜、巩膜、虹膜-睫状体常见感染细菌的有效治疗.
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