查看更多>>摘要:目的:观察电针"风府""太冲""足三里"对帕金森病(PD)小鼠中脑黑质沉默调节蛋白3(SIRT3)及其下游PTEN诱导的假定激酶1(PINK1)、PARK2基因编码蛋白(Parkin)介导的线粒体自噬的影响,探讨电针治疗PD的可能机制.方法:C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、电针组、假电针组,每组12只.采用腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶复制PD小鼠模型.电针组小鼠给予针刺"风府""太冲""足三里",每天1次,每次20 min,连续12 d.以旷场实验评估各组小鼠的运动能力;免疫组织化学法检测各组小鼠中脑黑质区酪氨酸羟化酶(TH)、α-突触核蛋白(α-syn)阳性表达;透射电镜观察黑质区神经元超微结构;免疫荧光染色法检测小鼠黑质自噬轻链蛋白3(LC3)的阳性表达;实时荧光定量PCR法检测小鼠黑质 TH、α-syn、SIRT3、PINK1、Parkin和线粒体自噬受体蛋白P62、Beclin-1、LC3 Ⅱ mRNA表达水平;W estern blot 法检测 小 鼠黑质 TH、α-syn、SIRT3、PINK1、Parkin、P62、Beclin-1、LC3 Ⅱ蛋白表达水平.结果:与对照组比较,模型组小鼠运动总距离、运动总时间、运动速度和进入中央区域的次数均下降(P<0.01);TH、LC3阳性表达减少(P<0.01),α-syn阳性表达增加(P<0.01);部分线粒体肿胀,线粒体嵴断裂减少,溶酶体数量减少;中脑黑质TH、SIRT3、PINK1、Parkin、Beclin-1、LC3 Ⅱ mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.01),α-syn和P62 mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.01,P<0.05).与模型组比较,电针组小鼠运动总距离、运动总时间、运动速度和进入中央区域的次数增加(P<0.01,P<0.05),TH、LC3阳性表达增加(P<0.01,P<0.05),α-syn阳性表达减少(P<0.01),线粒体数量增多,出现自噬小体,肿胀减轻,中脑黑质TH、SIRT3、PINK1、Parkin、Beclin-1、LC3 Ⅱ mRNA 及蛋白表达水平升高(P<0.01,P<0.05),α-syn、P62 mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.01);假电针组运动总距离、总时间增加(P<0.05),TH阳性表达增加(P<0.05),α-syn阳性表达减少(P<0.05),部分线粒体肿胀,未见自噬体出现,TH、SIRT3、Parkin、LC3 Ⅱ蛋白表达水平升高(P<0.01,P<0.05),P62 mRNA、α-syn mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.01,P<0.05),LC3 Ⅱ mRNA表达水平升高(P<0.05).与假电针组比较,电针组运动总时间延长(P<0.01),α-syn阳性表达及mRNA 表达水平下降(P<0.01,P<0.05),TH、SIRT3、PINK1、Parkin mRNA及SIRT3蛋白表达水平升高(P<0.05).结论:电针"风府""太冲""足三里"可改善PD小鼠运动能力,其机制可能是通过激活SIRT3/PINK1/Parkin通路,增强线粒体自噬,促进PD小鼠中脑黑质TH表达,减少α-syn聚集,从而发挥神经保护作用.