查看更多>>摘要:目的 探讨多房棘球蚴对肝组织p38MAPK通路的影响及肝组织p38MAPK分子表达水平对多房棘球蚴的作用.方法 从腹腔内保种的沙鼠取多房棘球蚴原头节,选取4~6周的C57BU6J小鼠,随机分为感染组、未感染组和抑制组,每组10只.抑制组肝门静脉注射SB202190溶液(5mg/kg,20%DMSO和80%生理盐水混合溶剂),未感染组和感染组仅注射溶剂,每周注射1次,共4周;感染组和抑制组小鼠开腹手术将500个原头节注射于肝脏被膜下,饲养8周.安乐处死后,取肝脏称重并计算肝重比(肝脏质量/体质量),取邻近(距离囊泡0.3 cm以内)及远离(距离囊泡1cm以外)多房棘球蚴囊泡的肝组织,用石蜡包埋并切片,进行苏木精-伊红(HE)染色、过碘酸雪夫/糖原(PAS)染色、Masson染色并分析炎性带、肝脏纤维化范围.采用TRIzol法提取肝组织RNA,实时荧光定量PCR(qPCR)检测MAPK14基因的表达水平.取各组邻近多房棘球蚴囊泡肝组织,采用蛋白质免疫印迹(Western blotting)和肝脏组织切片免疫组织化学,检测p38MAPK及p-p38MAPK表达水平.结果 未感染组肝重比为(6.49±0.19)%,感染组增加至(6.80±0.33)%(t=2.74,P<0.05);未感染组肝体积为(5.27±0.34)cm3,感染组增大至(5.80±0.49)cm3(t=2.83,P<0.05).HE染色结果显示,未感染组无炎性带,感染组和抑制组炎性带面积占比分别为(51.2±14.0)%和(23.8±9.8)%,抑制组与感染组相比肝组织坏死灶减少,炎性带减少(t=3.92,P<0.01).PAS染色结果显示,未感染组、感染组、抑制组紫红色染色区域面积占比分别为(1.3±0.3)%、(7.4±1.8)%、(4.5±0.4)%,抑制组紫红色染色区域相比感染组减少(t=3.82,P<0.05).Masson染色结果显示,未感染组无蓝染区域,感染组、抑制组蓝染区域占比分别为(34.9±4.1)%和(16.3±2.8)%,抑制组蓝染区域与感染组相比明显减少(t=9.16,P<0.01).qPCR结果显示,与远离多房棘球蚴病灶的肝组织(1)相比,感染组邻近病灶肝组织MAPK14相对表达水平为7.14±2.23(t=6.13,P<0.01);与未感染组(1)相比,感染组MAPK14相对表达水平为3.17±0.68(t=7.14,P<0.01).抑制组病灶邻近肝组织MAPK14基因相对表达水平为0.07±0.01,相比感染组表达量(1)明显降低(t=126.83,P<0.01).Western blotting结果显示,未感染组p38MAPK、p-p38MAPK相对表达量及p38MAPK/p-p38MAPK值分别为0.80±0.08、0.67±0.11、0.74±0.09,感染组分别为0.97±0.14、0.87±0.09、0.91±0.14,抑制组分别为0.41±0.07、0.20±0.07、0.49±0.21,抑制组与感染组相比均明显降低(t=7.97、13.32、3.74,均P<0.01).免疫组化结果显示,未感染组、感染组和抑制组p38MAPK评分分别为4(4,4)、6(6,9)、4(2,4)分,p-p38MAPK评分分别为 4(4,6)、9(8,9.75)、6(6,6)分,抑制组病灶邻近肝组织p38MAPK和p-p38MAPK的相对分子表达水平与感染组相比均明显降低(Z=-3.00、-3.11,均P<0.01).结论 多房棘球蚴可促进其邻近肝组织p38MAPK的表达及磷酸化,邻近肝组织的p38MAPK信号通路可参与维持多房棘球蚴的生长及侵袭能力.