查看更多>>摘要:目的 本文通过比较常见斑马鱼骨质疏松(osteoporosis,OP)模型不同建立方法,优化建立一种快速、稳定、灵敏的造模方法.方法 采用铁过载及泼尼松龙(prednisolone,Pred)诱导OP模型,观察骨形成情况及动物死亡率,分组为:空白对照组(Control组)、模型组(包括FAC组和Pred组)、阳性对照组(AC组).铁过载诱导法采用枸橼酸铁铵(ammonium ferric citrate,FAC)为造模药物.Pred 诱导法有 Pred-3 受精后天数(day post fertilization,dpf)法,造模时间为 3~9 dpf;Pred-5 dpf法,造模时间为 5~10 dpf;Pred撤药法,3 dpf开始造模,7~9 dpf每天撤去 1/3 造模药物.进而比较常用药物阿尔法骨化醇(alfacalcidol,AC)、骨化三醇(calcitriol,CA)、阿仑膦酸钠(alendronate,AL)抗OP效应,选择稳定、灵敏的阳性药,并进一步对不同染色方法及染色条件进行优化.结果 FAC在 500 μg/mL剂量下未能观察到对骨形成的显著影响.骨节数及第一椎骨长度结果显示,与Control组比较,Pred-3 dpf诱导法Pred组均降低,具有显著性差异(P<0.01,P<0.05),但斑马鱼死亡率较高;Pred-5 dpf法无显著性差异;Pred撤药法Pred组均降低,具有显著性差异(P<0.01),且无死亡.给予AC、CA、AL后均具有抗OP作用,CA抗OP作用更为灵敏、稳定.茜素红(alizarin red,ARS)染色参数优化结果显示,染色浓度为0.02%,染色 2 h,0.5%KOH和甘油分别以(3∶1,3h)和(1∶1,14 h)洗涤条件为最佳.染色对比结果显示,钙黄绿素对骨节部位染色较为灵敏,ARS则对第一椎骨处染色较为灵敏.结论 采用Pred撤药法可诱导建立快速、稳定、灵敏的斑马鱼OP模型,是研究OP的稳定可靠模型.