查看更多>>摘要:目的 探讨没食子酸(gallic acid,GA)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人THP1巨噬细胞炎症反应的抑制作用.方法 将人THP1单核细胞用佛波酯(phorbol myristate acetate,PMA)分化为巨噬细胞,用LPS诱导建立巨噬细胞炎症模型,给予不同浓度GA进行保护.CCK-8法筛选LPS和GA对THP1细胞的安全浓度;设正常组、模型组(100 μg/L LPS)和GA组(100 μg/L LPS+不同浓度GA).ELISA法检测各组细胞培养液白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平,微板法检测各组细胞培养液乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性和一氧化氮(nitric oxide,NO)含量,荧光染色检测各组细胞活性氧(ROS)水平、细胞损伤情况和线粒体跨膜电位的变化,Western blot法检测各组细胞环氧合酶-2(COX-2)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38)、核转录因子-κB(NF-κB)、NOD样受体3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、IL-1β和消皮素D(Gasdermin D,GSDMD)蛋白表达的影响.结果 与正常组比较,模型组细胞培养液IL-6、TNF-α、IL-1β和 NO的分泌增多(P<0.05),COX-2、HMGB1、p-ERK、p-JNK、p-P38、p-NF-KB、NLRP3、Caspase-1和 IL-1β蛋白表达升高(P<0.05),GSDMD蛋白表达水平降低(P<0.05),ROS生成和细胞损伤明显增多,线粒体跨膜电位较正常组显著降低,LDH活性显著升高(P<0.05);与模型组比较,GA组细胞培养液IL-6、TNF-α、IL-1β和NO的分泌减少(P<0.05),COX-2、HMGB1、p-ERK、p-JNK、p-P38、p-NF-κB、NLRP3、Caspase-1和IL-1β蛋白表达降低(P<0.05),GSDMD蛋白表达水平升高(P<0.05),ROS生成和细胞损伤减少,线粒体跨膜电位逐渐升高,LDH活性降低(P<0.05).结论 GA对LPS诱导的人THP1巨噬细胞炎症反应具有抑制作用,其抗炎机制可能涉及MAPK和NF-κB信号通路.