查看更多>>摘要:目的 探讨硒-甲基硒代半胱氨酸(selenium-methylselenocysteine,SMC)促进周围神经再生的可行性及其作用机制.方法 将大鼠雪旺细胞RSC96细胞随机分为5组,分别为A组(无任何处理对照组)、B组(加入 100 μmol/L H2O2)、C 组(加入 100 μmol/L H2O2+100 μmol/L SMC)、D 组(加入 100 μmol/L H2O2+200 μmol/L SMC)、E组(加入100 μmol/L H2O2+400 μmol/L SMC);通过MTT法检测SMC对细胞增殖的影响,确定合适剂量组别后,通过自由基(reactive oxygen species,ROS)免疫荧光检测细胞氧化应激水平.将36只4周龄雄性SD大鼠随机分为3组,分别为假手术组(Sham组)、坐骨神经损伤组(PNI组)及SMC治疗组(SMC组),每组12只;PNI组大鼠造模术后正常喂食、水,SMC组大鼠于每日饮用水中加入0.75 mg/kg SMC.术后4周各组大鼠坐骨神经取材行神经电生理检测复合肌肉动作电位(compound muscle action potential,CMAP)最高电位,ELISA法检测炎症因子IL-17、IL-6、IL-10和氧化应激因子过氧化氢酶(catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平,劳克坚劳蓝(luxol fast blue,LFB)染色观测髓鞘密度,免疫荧光染色观察胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和髓鞘碱性蛋白(myelinbasicprotein,MBP)荧光强度,透射电镜观察髓鞘形态并测量轴突直径,Western blot检测p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)、磷酸化 p38MAPK(phosphorylation p38MAPK,p-p38MAPK)、血红素氧合酶 1(heme oxygenase 1,HO-1)、核因子红细胞系 2 相关因子 2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)蛋白相对表达量.结果 MTT检测示加入SMC后显著促进RSC96细胞增殖,且低浓度即可达有效效果,故选择C组进入后续实验;ROS免疫荧光检测示B组较A组ROS荧光强度明显上升,C组较B组ROS荧光强度明显下降(P<0.05).动物实验神经电生理检测示,SMC组CMAP最高电位显著高于PNI组和Sham组(P<0.05).ELISA检测示,PNI组较Sham组IL-6、IL-17、MDA水平明显上升,IL-10、SOD、CAT水平明显下降;SMC组较PNI组IL-6、IL-17、MDA水平明显下降,IL-10、SOD、CAT水平明显上升(P<0.05).LFB染色和透射电镜检测示SMC组的髓鞘密度和轴突直径明显优于PNI组和Sham组(P<0.05).免疫荧光染色示SMC组GFAP和MBP荧光强度显著强于PNI组和Sham组(P<0.05).Western blot检测示SMC组Nrf2、HO-1蛋白相对表达量显著高于PNI组和Sham组,PNI组p-p38MAPK/p38MAPK蛋白表达量比值显著高于SMC组和Sham组(P<0.05).结论 SMC可能通过上调Nrf2/HO-1通路抑制神经损伤后的氧化应激和炎症反应,进而抑制p38MAPK通路磷酸化促进雪旺细胞增殖,最终促进髓鞘形成和加速周围神经再生.