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期刊信息/Journal information
中国畜牧兽医
中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
中国畜牧兽医

中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

李琍

月刊

1671-7236

zgxmsy@caas.cn

010-62811226，62810371，62816020

100193

北京市海淀区圆明园西路2号

中国畜牧兽医/Journal China Animal Husbandry & Veterinary Medicine北大核心CSTPCDCSCD
查看更多>>《中国畜牧兽医》于1974年2月创刊，是国家新闻出版行政主管部门2014年第一批资质认定的学术期刊，前身为《国外畜牧科技》，2002年更名为《中国畜牧兽医》，是“中国精品科技期刊”、“中国科技核心期刊”、北大《中文核心期刊要目总览》、“中国农林核心期刊”和“RCCSE中国核心学术期刊(A)”收录期刊。本刊设有营养与饲料、生理生化、生物技术、遗传繁育、基础兽医、预防兽医、临床兽医、质量安全、环境安全等栏目。
正式出版
收录年代

    基于CRISPR/Cas9技术构建猪KLF4基因敲除细胞系及其对细胞活性的影响分析

    董娇陆繁方晓敏陈瑜哲...
    893-902页
    查看更多>>摘要：[目的]试验旨在利用CRISPR/Cas9技术构建Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)基因敲除的猪小肠上皮细胞,并探究KLF4基因敲除对于细胞活性和细胞周期的影响.[方法]在猪KLF4基因转录本第1外显子区域设计3条sgRNAs(sgRNA1、sgRNA2和sgRNA3),经退火形成的双链DNA与线性化pGK1.1载体连接,产物转化大肠杆菌Top10感受态细胞进行鉴定,并将重组载体转染至猪小肠上皮细胞(IPEC-J2).PCR扩增敲除位点附近序列,并通过测序判断sgRNA敲除效率;利用CruiserTM Enzyme酶切鉴定阳性细胞克隆,通过TA克隆测序鉴定敲除序列;利用Western blotting检测基因敲除细胞中KLF4蛋白表达情况.利用CCK-8和流式细胞术检测KLF4基因敲除后细胞活性和细胞周期的变化.[结果]重组载体测序结果显示,sgRNAs与pGK1.1成功连接.分析敲除效率发现,3个sgRNAs均可对靶序列进行敲除,其中sgRNA3有较高的敲除效率.PCR产物经CruiserTM Enzyme酶切筛选出2个阳性单克隆细胞.TA克隆测序分析发现,KLF4基因2个等位基因序列分别缺失116和137 bp.Western blotting结果表明,KLF4基因敲除细胞中未见KLF4蛋白表达.细胞活性及细胞周期分析显示,敲除KLF4基因极显著抑制了细胞活性(P＜0.01),并导致G0/S细胞周期阻滞.[结论]本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了 KLF4基因敲除的IPEC-J2细胞,且KLF4基因敲除可抑制细胞活性,并引起G0/S细胞周期阻滞.KLF4基因敲除细胞可为进一步探究KLF4基因功能及分子机制提供材料.

    猪KLF4基因CRISPR/Cas9技术细胞活性细胞周期

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    秦川牛FADS基因家族克隆、生物信息学分析及组织表达研究

    尹思琦赵刚奎高海旭孙红红...
    903-915页
    查看更多>>摘要：[目的]试验旨在系统分析秦川牛脂肪酸去饱和酶(FADS)基因家族,阐明该家族成员在秦川牛不同组织及脂肪细胞不同分化时期的时空表达规律,为进一步探究其在牛脂肪沉积中的作用奠定基础.[方法]试验采集秦川牛不同组织样本,从肾周脂肪中分离前体脂肪细胞,通过PCR扩增FADS基因家族CDS区序列,利用生物信息学软件分析预测其序列特征.利用实时荧光定量PCR检测FADS基因家族成员在成年牛不同组织及肾周前体脂肪细胞分化过程中的时空表达谱.[结果]试验成功扩增出FADS基因家族3个成员(FADS1、FADS2和FADS3)CDS区,大小分别为1 425、1 335、1 332 bp.系统进化树结果显示,秦川牛FADS基因家族成员氨基酸序列与瘤牛相似性最高,与小鼠的亲缘关系较远.生物信息学预测结果显示,FADS基因家族均为较稳定的亲水性蛋白,二级结构主要由α-螺旋构成,三级结构与二级结构预测结果一致.FADS1和FADS2主要定位于内质网(44.4％、44.4％),FADS3主要定位细胞膜中(39.1％).实时荧光定量PCR结果显示,FADS1、FADS3基因在肌肉组织表达量较高,FADS2基因在肝脏中表达量最高,显著高于其他组织(P＜0.05).在脂肪细胞的成脂分化过程中,与其他时间点相比,FADS1和FADS2基因在第2天时表达量最高(P＜0.05),FADS3基因则在第2天时表达量最低(P＜0.05).[结论]本研究成功克隆了秦川牛FADS基因家族成员FADS1、FADS2、FADS3,在瘤牛、山羊、绵羊等哺乳动物中高度保守.FADS基因家族均为较稳定的亲水性蛋白,FADS1、FADS3基因在肌肉组织中高表达,FADS2基因在肝脏组织中高表达.在脂肪细胞的成脂分化过程中,分化第2天时,FADS1、FADS2基因表达量最高,FADS3基因表达量最低.试验结果进一步揭示FADS基因家族通过调控脂肪细胞分化进而影响肉牛脂肪沉积作用机制研究奠定基础.

    秦川牛FADS基因家族生物信息学表达

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    胎衣不下奶牛miRNA-185靶向调控血管内皮生长因子A表达的研究

    罗春海郑程远张梦龙姚伟佳...
    916-925页
    查看更多>>摘要：[目的]通过体内和体外试验检测miRNA-185及血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)在胎衣正常排出和胎衣不下(RFM)奶牛胎盘组织中的差异表达情况及VEGFA在奶牛母体胎盘组织中表达分布,验证及明确miRNA-185和VEGFA与奶牛胎衣不下发生密切相关并存在靶向调节关系,为深入研究miRNA-185在奶牛胎衣不下发生过程中的作用提供理论依据和试验基础.[方法]采用实时荧光定量PCR法检测胎衣正常排出及胎衣不下奶牛母体胎盘组织中miRNA-185及VEGFA基因表达情况,采用荧光原位杂交技术(FISH)检测VEGFA在母体胎盘组织的表达分布及mRNA的差异表达情况;采用双荧光素酶明确miRNA-185与VEGFA的靶向调节关系,采用实时荧光定量PCR及Western blotting检测体外转染miRNA185 mimics、miRNA-185 inhibitor及miRNA-185 NC后VEGFA mRNA及蛋白的差异表达情况.[结果]实时荧光定量PCR结果显示,与胎衣正常排出奶牛相比,胎衣不下奶牛体内miRNA-185及VEGFA的表达水平均极显著下调(P＜0.01);荧光原位杂交结果显示,VEGFA mRNA主要在奶牛子宫内膜上皮细胞中表达.VEGFA是miRNA-185的靶向调节蛋白.与阴性对照组相比,转染miRNA-185 mimics后VEGFA的mRNA及蛋白表达水平均极显著下调(P＜0.01),转染miRNA-185 inhibitor后VEGFA的mRNA及蛋白表达水平均极显著上调(P＜0.01).[结论]胎衣不下奶牛母体胎盘组织内miRNA-185及VEGFA表达显著降低,VRGFA主要在子宫内膜上皮细胞中表达,miRNA-185可通过靶向调控VEGFA的表达参与奶牛胎衣不下的发生发展.

    奶牛胎衣不下miRNA-185血管内皮生长因子A母体胎盘

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    贵州白山羊肌细胞生成素基因克隆与生物信息学分析

    宋兴超孟金柱赵园园吴震洋...
    926-935页
    查看更多>>摘要：[目的]克隆贵州白山羊肌细胞生成素(myogenin)基因并对其结构特性进行生物信息学分析,为进一步探索该基因调控山羊肌肉发育的分子机制提供重要参考依据.[方法]以贵州白山羊血液基因组DNA为模板,设计4对特异性引物,运用PCR扩增、Sanger直接测序及序列拼接方法获得贵州白山羊myogenin基因完整编码区核苷酸序列,应用 BioEdit 7.0、NetPhos 3.1、Conserved Domains Search、SMART、Motif Scan 等生物信息学软件分别分析该基因核苷酸与氨基酸序列的组成、编码蛋白磷酸化位点、关键结构域和功能模体等结构特性,通过DNAStar Lasergene、DNAMAN 8.0和Mega 5.0软件分别进行15个偶蹄目物种myogenin基因编码氨基酸序列相似性比对及系统进化树构建.[结果]贵州白山羊myogenin基因序列全长2 424 bp(获得GenBank登录号:HZ53289),由3个外显子、2个内含子、部分5'-UTR和3'-UTR构成,长度分别为471、82、122、765、589、135和260 bp,编码区长度为675 bp,共编码224个氨基酸.贵州白山羊myogenin蛋白第1-86位氨基酸为生肌决定因子(myogenic determining factors,MyoD)家族特有碱性结构域(Basic domain),第81-139位氨基酸为螺旋-环-螺旋(helix-loop-helix,H-L-H)结构域,第160-170位氨基酸为低复杂度结构域,存在21个磷酸化位点和核定位信号蛋白等功能模体结构.氨基酸序列比对表明,6个半胱氨酸残基、1个核定位信号和1个低复杂度结构域在15个偶蹄目物种完全保守.myogenin基因编码氨基酸序列相似性与系统进化分析均显示,贵州白山羊与波尔山羊、湖羊和马可波罗盘羊的亲缘关系最近.[结论]本研究成功克隆得到贵州白山羊myogenin基因全长序列,大小为2 424 bp,编码224个氨基酸,myogenin蛋白包含Basic domain和H-L-H结构域.该结果可为myogenin基因调控山羊肌肉发育的分子机制研究提供理论参考.

    贵州白山羊myogenin基因克隆分子系统进化生物信息学

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    响应面法模拟优化蜡样芽孢杆菌W-3菌株产木聚糖酶发酵条件

    肖遥李旭旭闫丽欢范新凤...
    936-944页
    查看更多>>摘要：[目的]应用响应面法对产木聚糖酶的工艺进行优化,为进一步大规模生产提供参考依据.[方法]通过单因素试验分别考察碳源、氮源、pH、温度、接种量和转速6个因素对蜡样芽孢杆菌W-3产木聚糖酶的影响.通过 Design Expert 10.0.3软件中的Box-Behnken进行响应面优化设计.通过对小麦麸皮、氯化铵、pH、温度、接种量和转速进行不同组合,系统地优化了发酵条件.利用二次响应面回归方法建立酶产量与各因素之间的数学模型,并通过回归分析确定各因素对酶产量的影响程度.[结果]小麦麸皮添加量、氯化铵添加量、pH和温度是影响发酵的主效应因素,单因子优化显示,蜡样芽孢杆菌W-3发酵产木聚糖酶条件为小麦麸皮35 g/L、氯化铵5 g/L、pH 8.0、温度70 ℃、接种量2％、转速210 r/min.在单因子优化的基础上进一步应用响应面优化,找到了更优的发酵参数,经过优化后的发酵条件为小麦麸皮33.0 g/L、氯化铵5.1 g/L、pH 8.3、温度73 ℃、接种量2％、转速210 r/min,该条件下蜡样芽孢杆菌W3发酵产生的木聚糖酶的酶活为523.24 U/mL.[结论]本试验通过响应面法优化了蜡样芽孢杆菌W-3发酵条件,在33.0 g/L小麦麸皮、5.1 g/L氯化铵、pH 8.3、73 ℃、2％接种量、210 r/min条件下,可获得较高的木聚糖酶的酶活(523.24 U/mL),比优化之前(225.53 U/mL)提高了2.32 倍.

    蜡样芽孢杆菌W-3木聚糖酶Box-Behnken设计响应面法

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    超氧化物歧化酶的生理功能及其在动物生产中的应用前景

    江慧琼刘雅婷陈清华
    945-954页
    查看更多>>摘要：氧化应激会导致机体内的氧化与抗氧化的失衡,从而产生过多的活性氧(reactive oxygen species,ROS)基团造成细胞和组织的损伤、机体炎症等疾病,影响机体的生长发育.超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)是存在于生物体内的一种抗氧化金属酶,它能够通过歧化反应催化超氧阴离子自由基(superoxide anionradical,O2-),从而清除动物机体内过多的ROS.研究发现,SOD不仅在抗氧化功能上具有专一性、高效性,能够减缓机体衰老,并且还能在一定程度上提高动物肠道健康、生产性能和调节机体免疫功能.在集约化畜禽养殖、生产机器的大规模使用情况下,辐射对于动物所造成的损伤需要引起关注,有效地利用SOD的抗辐射功能以缓解或改善辐射对于机体的影响,值得进一步探索.目前,针对缓解机体氧化应激的添加剂主要有维生素、微量元素、植物提取物等,而利用SOD来缓解动物氧化应激、提高生产性能的研究相对较少,主要源于天然SOD提取成本高、分子质量大、易失活等.但随着人工合成SOD的出现,降低了制备SOD的成本,且SOD具备高活性、小分子易吸收的特点,这使得SOD在畜禽生产中的应用逐渐增多,未来可以挖掘更多SOD的应用潜力,将SOD更广泛地应用于动物生产中.笔者对SOD抗氧化、抗衰老、抗炎症、抗辐射、调节机体免疫等生理功能进行了总结,以期为SOD在动物生产中的应用提供更多理论依据.

    超氧化物歧化酶(SOD)生理功能动物生产应用

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    间充质干细胞在畜牧业中应用研究进展

    季新澎金诗宇滕海龙周禹泽...
    955-966页
    查看更多>>摘要：干细胞是一类拥有强大增殖再生潜能的多能细胞,能够调节体内各项机能且免疫原性较低,在畜牧领域中有着巨大的应用潜力.间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是一种多能细胞,拥有干细胞的所有共性,且具有来源广泛,易于分离、道德和法律约束性低等特点,从基础研究逐步推进到临床应用阶段.MSCs通过迁移和旁分泌机制在体内发挥调控作用,如抵抗病原入侵,稳定免疫反应,减少细胞应激、促进组织再生等.然而,不同组织来源的MSCs生物学特性存在差异,其表面标记物是鉴别的重要依据.现阶段,MSCs的相关研究从人和宠物领域逐渐向畜牧业拓展,在牛、马等大动物体内也展现出强大的应用潜力.凭借其抗炎修复能力,可有效保护动物机体,促进疾病预后,提升动物的经济价值.但由于相关研究还不够深入,许多问题未能得到解决,使得大规模应用受到限制.为进一步提高MSCs的应用潜力,加快由实验室向实际应用的转化,细胞培养、基因编辑以及生物材料等领域的研究也在不断拓展.为此,作者通过系统梳理相关文献,介绍了 MSCs来源、特性及作用机制,总结了其在畜牧领域的研究进展和应用潜力,以期为MSCs在畜牧业中的应用提供新思路.

    间充质干细胞免疫调节组织修复感染炎症

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    核桃青皮提取物对绵羊瘤胃体外发酵及微生物区系的影响

    张萧李璇玥王蕾方美烟...
    967-977页
    查看更多>>摘要：[目的]研究核桃青皮提取物对绵羊瘤胃体外发酵参数及微生物区系的影响,以阐明其在调控瘤胃发酵中的作用.[方法]以精粗比为65∶35的饲粮为底物,分别添加0、0.125％、0.25％、0.50％和1.00％(底物质量)的乙酸乙酯(Ea)、水(Dw)及50％乙醇(Ha)核桃青皮提取物,体外发酵24 h.发酵期间记录产气量,发酵结束后测定发酵参数、底物降解率、乳酸(LA)浓度及相关酶活性;基于16S rDNA V4区高通量测序分析绵羊瘤胃细菌区系的变化.[结果]与对照组相比,Ea组pH、干物质降解率(DMD)、乙丙比、6-磷酸果糖激酶(PFK)、己糖激酶(HK)及丙酮酸激酶(PK)活性均极显著升高(P＜0.01),24 h累积产气量(GP24h)、原虫数、氨态氮(NH3-N)及乙酸、丙酸、戊酸、总挥发性脂肪酸(TVFA)和LA浓度极显著或显著降低(P＜0.01;P＜0.05);Dw组pH、GP24h、中性洗涤纤维降解率(NDFD)、丙酸、异丁酸、戊酸、LA浓度及PFK、HK和PK活性极显著或显著降低(P＜0.01;P＜0.05),乙丙比极显著升高(P＜0.01);Ha组GP24h、DMD、NDFD、异丁酸、丁酸、异戊酸浓度及乙丙比极显著或显著降低(P＜0.01;P＜0.05),原虫数、NH3-N及丙酸浓度均极显著或显著升高(P＜0.01;P＜0.05).16S rDNA测序表明,与对照组相比,Ea组Alpha多样性指数、厚壁菌门、拟杆菌门及肠群理研菌属RC9相对丰度极显著或显著升高(P＜0.01;P＜0.05),变形菌门、琥珀酸弧菌属和解琥珀酸菌属相对丰度极显著或显著降低(P＜0.01;P＜0.05);Dw组Shannon指数、拟杆菌门、肠群理研菌属RC9及未培养瘤胃细菌相对丰度极显著或显著降低(P＜0.01;P＜0.05);Ha组Alpha多样性指数及厚壁菌门相对丰度均极显著降低(P＜0.01),琥珀酸弧菌属、普雷沃氏菌属及解琥珀酸菌属相对丰度显著或极显著升高(P＜0.05;P＜0.01).[结论]在饲粮中添加核桃青皮乙酸乙酯提取物后可有效改善绵羊瘤胃发酵,添加剂量以底物质量的0.25％效果最好.

    核桃青皮提取物绵羊体外发酵微生物区系

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    有机酸与精油、单宁酸、复合酶制剂复配对断奶仔猪生长性能、血清生化指标和肠道健康的影响

    阳治康殷运菊徐伟伟陈广...
    978-989页
    查看更多>>摘要：[目的]研究有机酸与精油、单宁酸、复合酶制剂复配对断奶仔猪生长性能、血清生化指标和肠道健康的影响,为其在仔猪中的生产应用提供理论依据.[方法]选用健康、体重相近(6.48 kg±0.68 kg)的25日龄断奶仔猪(杜×长×大)240头,随机分为5个组,每组6个重复,每个重复8头.饲粮处理如下:基础饲粮(CON);CON+5 kg/t 有机酸(OA);CON+5 kg/t OA+800 g/t 精油(OAEO);CON+5 kg/t OA+500 g/t单宁酸(OATA);CON+5 kg/t OA+500 g/t复合酶(OACE).预试期3 d,正试期28 d.分别于第1和29天以重复为单位对仔猪空腹称重并统计采食量,计算生长性能;收集饲料样品和粪便样品,测定养分表观消化率;收集血液样品,测定血清抗氧化性能和免疫性能指标;分离胃和各肠段(十二指肠、空肠、回肠和盲肠),测定胃肠道pH;收集空肠黏膜,测定消化酶活性;取空肠和回肠中段,用于肠道形态的测定;收集盲肠内容物,用于短链脂肪酸测定.[结果]①与CON和OA组相比,OAEO组断奶仔猪料重比(F/G)显著降低(P＜0.05).②与CON组相比,OA和OAEO组仔猪血清超氧化物歧化酶(SOD)活性显著提高(P＜0.05),OATA组血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著提高(P＜0.05),OA、OAEO、OATA和OACE组血清丙二醛(MDA)含量均显著降低(P＜0.05).③与CON和OA组相比,OATA组仔猪血清免疫球蛋白G(IgG)、白介素-2(IL-2)和IL-22含量均显著提高(P＜0.05),OAEO、OATA和OACE组血清D-乳酸(D-LA)含量均显著降低(P＜0.05).④与CON组相比,OAEO和OACE组仔猪胃、十二指肠和空肠pH均显著降低(P＜0.05),OA、OAEO、OATA和OACE组空肠和回肠绒毛高度均显著提高(P＜0.05).与CON和OA组相比,OACE组空肠α-淀粉酶、蔗糖酶和乳糖酶活性均显著提高(P＜0.05),OATA和OACE组干物质(DM)、粗灰分(Ash)、粗脂肪(EE)和磷(P)表观消化率均显著提高(P＜0.05).⑤与CON和OA组相比,OAEO组仔猪盲肠乙酸浓度显著提高(P＜0.05),OAEO、OATA和OACE组盲肠异丁酸浓度均显著降低(P＜0.05).[结论]有机酸与精油复配在提高断奶仔猪生长性能方面效果较好;与单宁酸复配在提高仔猪抗氧化和免疫性能方面效果较好;与酶制剂复配在改善仔猪消化功能和提高养分表观消化率方面效果较好.

    有机酸精油单宁酸复合酶断奶仔猪生长性能

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    发酵中药和油莎豆复合物对湖羊生长性能及血清抗氧化和免疫指标的影响

    李春鑫乔宏兴王会伟范明夏...
    990-998页
    查看更多>>摘要：[目的]研究发酵中药和油莎豆复合物对湖羊生长性能、血清抗氧化及免疫指标的影响,为新型饲料添加剂的开发提供依据.[方法]选取体重相近、健康状况良好的育肥湖羊40只,随机分为2组:对照组和试验组,每组20只.对照组湖羊饲喂基础饲粮,试验组湖羊在基础饲粮中添加2％复合发酵物,预试期7 d,正试期42 d,在正试期第0、42天分别称重,计算平均日增重;记录日采食量,计算料重比;在试验第1、21和42天颈静脉采血并分离血清,测定湖羊血清中抗氧化指标和免疫指标.[结果]试验组湖羊的终末体重、平均日增重及平均日采食量均显著高于对照组(P＜0.05).与对照组相比,在试验第21天,试验组湖羊血清中过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力(T-AOC)活性及免疫球蛋白G(IgG)、γ干扰素(INF-γ)含量分别提高了 2.75％、3.46％、7.28％和4.55％(P＜0.05),丙二醛(MDA)含量降低了 12.72％(P＜0.05);在试验第42天,CAT、T-AOC活性及IgG、INF-γ含量分别提高了3.17％、3.67％、9.77％和 11.91％(P＜0.05),MDA 含量降低了 15.10％(P＜0.05).[结论]在本试验条件下,饲粮中添加2％发酵中药和油莎豆复合物能有效改善湖羊的生长性能,提高抗氧化和免疫机能,可作为一种新型饲料添加剂应用到畜牧生产中.

    复合发酵物湖羊生长性能抗氧化免疫

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