查看更多>>摘要：为制备灰树花多糖(GFP)纳米乳,并观察其理化及形态学特征,评估其对H9亚型禽流感病毒(AIV)及3种常见细菌的抑制效果,本研究采用低能乳化法制备GFP纳米乳,经不同方式处理后观察GFP纳米乳的稳定性,分别采用透射电镜和扫描电镜观察其形态特征,使用激光粒度仪测定GFP纳米乳的粒径与多分散系数(PDI),使用电位仪测定其Zeta电位.结果显示:该GFP纳米乳外观澄清、透明,8 000 r/min离心20 min和室温静止7d后不分层、不破乳,表明制备的GFP纳米乳性状稳定.电镜观察可见许多单一分布的均匀圆球,其周围包裹着网格状凝胶基质;GFP纳米乳的粒径为10 nm～100 nm,平均粒径24.12 nm,PDI为0.096,Zeta电位为-18.6±4.3 mV,表明GFP纳米乳稳定性较好.将不同浓度的GFP纳米乳及免手洗凝胶消毒剂分别于MDCK细胞中与H9亚型AIV NJ02株作用,通过计算各药物对H9亚型AIV的抑制率比较GFP纳米乳对H9亚型AIV的抑制效果.将不同稀释度的GFP纳米乳、GFP溶液及免手洗凝胶和75％乙醇分别与AIV NJ02株作用后,采用荧光定量PCR(qPCR)检测H9亚型AIV基因的拷贝数,并计算各药物对H9亚型AIV的抑制率.采用药敏纸片法检测GFP纳米乳、GFP原液、免手洗凝胶对禽舍3种常见细菌的抑菌效果.对H9亚型AIV的抑制率检测结果显示,当浓度低于10 μL/mL时,GFP纳米乳及免手洗凝胶消毒剂对H9亚型AIV的抑制率均小于55％,效果不明显;当浓度大于40 μL/mL时,GFP纳米乳对H9亚型AIV的抑制率极显著高于同浓度的免手洗凝胶(P＜0.01);当浓度为80 μL/mL时,GFP纳米乳可以100％抑制病毒增殖,且对细胞无毒性.qPCR结果显示,10倍稀释的各药物对H9亚型AIV的抑制率均明显高于100倍稀释的各药物,且10倍稀释的GFP纳米乳对H9亚型AIV的抑制率均极显著高于免手洗凝胶、GFP原液和75％乙醇(P＜0.01).纸片扩散法结果显示,GFP纳米乳对金黄色葡萄球菌的抑菌效果较差,对枯草芽孢杆菌和大肠杆菌的抑菌效果较强,但总体GFP纳米乳的抑菌效果比免手洗凝胶稍差.上述结果表明,本研究制备的GFP纳米乳性状稳定,对体外培养的H9亚型AIV具有良好的抑制效果,对禽舍常见细菌具有一定的抑制效果,且安全无毒副作用,有望作为安全高效的纳米消毒剂用于畜禽和人类的消毒.本研究为开发新型抗病毒中草药纳米消毒剂奠定了实验基础.
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