查看更多>>摘要：目的 探讨杜鹃素对脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用及机制.方法 ①ICR雄性小鼠随机分为正常对照组、模型组、模型+杜鹃素组.模型+杜鹃素组ig给予杜鹃素20和40 mg·kg-1,连续预处理4d,第5d模型组和模型+杜鹃素组均气管滴注LPS 3 mg·kg-1,诱导24h制备ALI小鼠模型.正常对照组气管滴注等体积生理盐水.苏木精-伊红染色(HE)观察肺部病理变化;湿干重比(W/D)评估肺水肿;伊文思蓝染色法(EBD)检测肺血管通透性;比色法检测肺组织中髓过氧化物酶(MPO)活性;血球计数板计数肺泡灌洗液(BALF)中白细胞数量;酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺组织和BALF中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、IL-10和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;Western印迹法检测肺组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(ARG1)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1(caspase1)和gasdermin家族成员(GSDMD-N)蛋白表达水平及NF-κB p65磷酸化水平.②将小鼠肺泡巨噬细胞(MH-S)随机分为细胞对照组、模型组、模型+杜鹃素组.模型组用LPS 100 μg·L-1和IFN-γ 40 μg·L-1 共孵育24 h,模型+杜鹃素组用杜鹃素5,10和20 μmol·L-1预处理24 h,然后用LPS 100 μg·L-1和IFN-γ 40 μg·L-1 共孵育24 h,建立体外炎症细胞模型.CCK-8测定细胞存活率;ELISA法检测细胞上清液中IL-1β,IL-6,IL-10和TNF-α含量;Western印迹法检测MH-S细胞中iNOS,ARG1,NLRP3,caspase1和GSDMD-N蛋白表达水平及NF-κB p65磷酸化水平.结果 ①与正常对照组相比,模型组小鼠肺组织病理损伤评分、W/D比值、肺血管通透性、MPO活性、白细胞数量和促炎因子IL-1β,TNF-α,IL-6含量及肺组织中iNOS,NLRP3,caspase1,GSDMD-N蛋白表达水平以及NF-κB p65磷酸化水平显著升高(P<0.05,P<0.01),抗炎因子IL-10和ARG1表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01).与模型组相比,模型+杜鹃素组小鼠肺组织病理损伤评分、W/D比值、肺血管通透性、白细胞数量、MPO活性和IL-1β,TNF-α,IL-6含量及肺组织中iNOS,NLRP3,caspase1,GSDMD-N蛋白表达水平以及NF-κB p65磷酸化水平显著降低(P<0.05,P<0.01);IL-10和ARG1表达水平显著升高(P<0.05,P<0.01).②与细胞对照组相比,模型组IL-1β,TNF-α和IL-6含量和iNOS,NLRP3,caspase1,GSDMD-N蛋白表达水平及NF-κB p65磷酸化水平显著升高(P<0.05,P<0.01),IL-10和ARG1表达水平显著降低(P<0.01).与模型组相比,模型+杜鹃素组IL-1β,TNF-α和IL-6含量和iNOS,NLRP3,caspase1,GSDMD-N蛋白表达水平及NF-κB p65磷酸化水平显著降低(P<0.05,P<0.01),IL-10和ARG1表达水平升高(P<0.05,P<0.01).结论 杜鹃素对LPS诱导小鼠ALI具有保护作用,其作用机制可能与抑制NF-κB p65磷酸化、抑制NLRP3炎症小体的激活和减轻细胞焦亡及调节巨噬细胞极化有关.
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