查看更多>>摘要：探究尪痹片(Wangbi Tablets,WBT)通过调控cGAS-STING信号通路改善肾虚证胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠炎症水平的作用机制.24只SPF级SD大鼠,随机选取18只构建肾虚证CIA模型,共分为4组,每组6只,分别为空白对照组(control组)、肾虚证CIA组(model组)、肾虚证CIA+WBT组(M+WBT组)、肾虚证CIA+甲氨蝶呤(metho-trexate,MTX)组(M+MTX组).评估各组肾虚证和关节炎评分;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色、番红-固绿染色观察踝关节、滑膜及软骨的病理变化情况;免疫组化(immunohistochemistry,IHC)检测踝关节骨组织内DNA聚合酶β(polymerase beta,Polβ)、环磷酸鸟苷-腺苷合成酶(cGAS)的表达水平;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测Poβ、cGAS、干扰素刺激因子(STING)、磷酸化STING(p-STING)、核因子 κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)、磷酸化 NF-κB(phospho-NF-KB,p-NF-KB)、干扰素调节因子 3(interfer-on regulatory factor 3,IRF3)、消皮素 D(gasdermin D,GSDMD)、GSDMD 蛋白 N 端(GSDMD-NT)、半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)的表达水平;TUNEL染色检测踝关节骨组织细胞凋亡率.结果显示,与control组相比,model组肾虚和关节炎症状和体征变化最严重,经WBT干预后关节变形、精神状态、毛色有一定程度改善;与model组相比,WBT能够显著改善肾虚和关节炎症状.与control组相比,model组血清IL-18、IL-1β水平升高;与model组相比,M+WBT组IL-18水平显著降低,IL-1β有降低趋势.与control组相比,model组踝关节骨组织内可见大量炎细胞浸润伴结构破坏,软骨基质已破坏,WBT能够减轻model组大鼠踝关节骨组织的炎症、骨与软骨破坏.与 control 组相比,model 组 cGAS、IRF3、p-NF-κB/NF-κB、caspase-1、cleaved-caspase-1 水平显著升高,p-STING/STING、GSDMD、GSDMD-NT升高;与model组相比,WBT干预后的model组大鼠踝关节骨组织中Polβ表达显著增强,cGAS、IRF3、GSDMD、GSDMD-NT、caspase-1 表达水平显著降低,p-STING/STING、p-NF-κB/NF-κB、cleaved-caspase-1有降低趋势.与control组比,model组骨组织内、滑膜、新生血管内皮处细胞凋亡显著降低,WBT的干预能够增加滑膜等处的细胞凋亡.综上得出,WBT对肾虚证CIA大鼠有治疗作用,其机制体现在显著提高踝关节骨组织的Polβ的表达水平,抑制cGAS-STING信号通路,降低焦亡标志蛋白的表达,减少细胞因子的释放,从而减轻炎症反应,延缓骨破坏的进展,发挥防治RA的作用.
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