查看更多>>摘要：目的 评价脾脏浆细胞样树突状细胞(pDCs)活化对小鼠心肌缺血再灌注损伤的影响.方法 动物实验:SPF级健康雄性C57BL/6J小鼠36只,10周龄,体质量22～27 g,按照随机数字表法分为3组(n=12):假手术组(Sham组)、心肌缺血组(MI组)和心肌缺血再灌注组(MI/R组).MI组阻断小鼠左冠状动脉前降支(LAD)40 min,MI/R组阻断LAD 40 min再灌注1 h,Sham组仅穿线不结扎.造模成功后,随机选取各组3只摘取心脏采用TTC-亚甲蓝双染色法测定心肌梗死面积,随机选取各组3只摘取心脏采用HE染色法观察心肌组织病理学结果,其余各组6只先采集腹主动脉血样,采用ELISA法检测血浆干扰素α(IFN-α)浓度,再摘取心脏后收集小鼠心脏灌洗液(CP).细胞实验:SPF级健康雄性C57BL/6J小鼠12只,10周龄,体质量22～27 g,采用免疫磁珠法分离脾脏pDCs(阳性细胞比例＞85％),采用随机数字表法分为Sham组CP刺激pDCs组(pDCs+CP-Sham组)、MI 组 CP 刺激 pDCs 组(pDCs+CP-MI 组)、MI/R 组 CP 刺激 pDCs 组(pDCs+CP-MI/R 组)和 PBS 刺激pDCs组(pDCs+PBS组),分别采用Sham组、MI组、MI/R组小鼠CP和PBS刺激8 h.采用流式细胞术检测各组pDCs表面CD45、共刺激分子CD80、CD86和主要组织相容性复合物Ⅱ(MHC Ⅱ)分子的表达,采用ELISA法检测各组细胞培养上清液IFN-α的浓度.结果 动物实验:与Sham组和MI组比较,MI/R组小鼠心肌梗死体积百分比升高,血浆IFN-α浓度增加(P＜0.05),心肌细胞出现明显空泡变性,心肌纤维断裂严重,大量炎症细胞浸润;Sham组各指标与MI组比较差异无统计学意义(P＞0.05).细胞实验:与pDCs+CP-Sham组比较,pDCs+CP-MI组CD80、CD86和MHC Ⅱ分子表达上调(P＜0.05),pDCs+CP-MI/R组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与pDCs+CP-MI/R组比较,pDCs+CP-MI 组上述指标表达上调(P＜0.05);与 pDCs+CP-Sham 组和 pDCs+CP-MI/R 组比较,pDCs+CP-MI 组细胞培养上清液 IFN-α 浓度增加(P＜0.05),pDCs+CP-Sham 组与 pDCs+CP-MI/R 组 IFN-α浓度比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 小鼠心肌缺血再灌注损伤的机制可能与心肌缺血后脾脏pDCs受刺激活化产生IFN-α有关.
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