查看更多>>摘要：目的 探讨糖尿病足患者创面中耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)携带生物膜基因和群体感应基因情况,以及CRAB对抗生素的耐药情况.方法 该研究为回顾性观察性研究.2020年10月-2023年9月,天津医科大学朱宪彝纪念医院糖尿病足科收治177例符合入选标准的糖尿病足患者,其中男128例、女49例,年龄(56±10)岁.从前述患者的糖尿病足创面中培养出233株鲍曼不动杆菌,先用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定细菌,然后采用动态比浊法通过全自动微生物系统做药物敏感试验分析耐药率.任意选择10株CRAB[来自10例患者,其中男9例、女1例,年龄(63±13)岁]和10株碳青霉烯类敏感鲍曼不动杆菌[CSAB,来自10例患者,其中男8例、女2例,年龄(63±9)岁],提取DNA并进行全基因组测序,使用综合抗生素耐药基因数据库对耐药基因进行注释,绘制系统发育树分析CRAB与CSAB的同源关系.将鲍曼不动杆菌的7个管家基因输入PubMLST网站,分析CRAB与CSAB的多位点序列分型.将测得的全部基因放入PubMLST网站查找每株鲍曼不动杆菌是否携带生物膜基因 bap、csuA、csuB、csuA/B、csuC、csuD、csuE、pgaA、pgaB、pgaC、pgaD、bfmR、bfmS、ompA和群体感应基因abaI、abaR及鞭毛基因pilA,并比较CRAB与CSAB携带这些基因的差异.分析携带苯唑西林酶(OXA)耐药基因blaOXA的CRAB与CSAB所携带生物膜基因和群体感应基因情况.大体观察感染CRAB与CSAB的糖尿病足创面中是否存在胶冻样膜样结构,若存在则采用扫描电子显微镜观察其微观结构.结果 检测到的鲍曼不动杆菌中,CSAB、CRAB、多重耐药鲍曼不动杆菌、泛耐药鲍曼不动杆菌的阳性检出率分别为16.7％(39/233)、83.3％(194/233)、95.3％(222/233)、34.3％(80/233),未检测到全耐药鲍曼不动杆菌.233株鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药率均＞80％;对头孢哌酮/舒巴坦的耐药率较低,为37％,对其他头孢类抗生素(头孢噻肟、头孢他啶、头孢替坦和头孢呋辛)的耐药率均＞80％;对青霉素类抗生素的耐药率均＞80％;对喹诺酮类抗生素的耐药率均＞60％;对米诺环素的耐药率仅为12％;对替加环素和黏菌素的耐药率均＜1％.系统发育树显示,10株CRAB高度同源,而10株CSAB的同源度不高.多位点序列分型分析显示,10株CRAB均为一种分型;10株CSAB中除1株无分型外,其余9株有7种分型.10株CRAB中有8株均含有完整的生物膜基因和群体感应基因;10株CSAB的生物膜基因均不完整,且均不携带bap基因.CRAB与CSAB均不携带鞭毛基因pilA.与CRAB相比,CSAB携带的生物膜基因bap、csuA、csuC、csuD及群体感应基因abaI和abaR均显著下降(P＜0.05).CRAB携带的主要blaOXA大类为blaOXA-23-like(具体为blaOXA-167)和blaOXA-51-like(具体为blaOXA-66),均有碳青霉烯酶活性.10株CRAB中有8株同时携带blaOXA-66和blaOXA-167且均有较为完整的群体感应基因和生物膜基因.CSAB携带的主要blaOXA大类为blaOXA-51-like和blaOXA-213-like,虽然有碳青霉烯酶活性,但临床药物敏感试验显示其均对碳青霉烯类抗生素敏感.感染CRAB的创面中可见胶冻样膜样结构,为细菌生物膜;感染CSAB的创面中未找到胶冻样膜样结构.结论 糖尿病足创面中的CRAB与CSAB在多位点序列分型、携带的生物膜基因和群体感应基因及blaOXA基因方面存在较大差异,导致两者对抗生素的耐药情况也存在差异.
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