查看更多>>摘要:目的 构建一种新的靶向CD123抗原的双特异性抗体(CD123 DuAb),研究CD123DuAb在急性髓系白血病(AML)治疗中的作用.方法 以自主研发的CD123单克隆抗体可变区为基础,利用分子克隆技术,构建CD123 DuAb表达质粒,转染ExpiCHO-S细胞,表达该双功能抗体.通过功能实验,验证CD123 DuAb在T细胞活化及增殖中的作用,及其促进T细胞对AML细胞的杀伤作用.结果 ①构建了CD123 DuAb表达质粒,并通过Expi-CHO真核系统表达.②CD123 DuAb可以分别与T细胞上的CD3位点及CD123阳性肿瘤细胞上的CD123位点结合.③将1 nmol/L CD123 DuAb加入T细胞与MV4-11细胞共培养体系中,T细胞中CD69阳性表达率为68.0%,CD25阳性表达率为44.3%,均显著高于对照组(P值均<0.05).④在CD123 DuAb浓度为1 nmol/L的条件下培养T细胞,可促进T细胞增殖,其绝对计数第1天为5×105/ml,第9天扩增至3.2× 106/ml,且CFSE荧光强度显著降低.⑤CD123 DuAb能够显著激活T细胞,且激活强度与其浓度呈正相关,浓度为1 nmol/L时,T细胞CD107a表达率可达16.05%,较对照组显著升高(P<0.05).⑥随培养体系中CD 123 DuAb浓度的升高,T细胞耗竭和凋亡也随之增加,浓度为1 nmol/L时,T细胞CD8+PD-1+LAG-3+比例为10.90%,PI-Annexin V+比例为 18.27%,PI+Annexin V+比例为 11.43%,均较对照组显著升高(P<0.05).⑦CD123 DuAb能够促进T细胞分泌细胞因子,浓度为1 nmol/L时,共培养体系上清中的IFN-γ和TNF-a的浓度可分别达到193.8pg/ml和169.8pg/ml,较对照组显著升高(P<0.05).⑧将CD123 DuAb以1 nmol/L的浓度加入T细胞与CD123阳性肿瘤细胞共培养体系中,能显著增强T细胞对肿瘤细胞的杀伤作用,共培养3d,CD123+MV4-11细胞、CD123+Molm13细胞和CD123+THP-1细胞的残留率分别为7.4%、6.7%和14.6%,较对照组显著降低(P<0.05).结论 本研究构建及表达了一种靶向CD123的双特异性抗体,并通过体外实验验证其可以同时结合CD123阳性肿瘤细胞和T细胞,促进T细胞的活化和增殖,增强其抗白血病作用,为进一步临床研究提供了基础.