查看更多>>摘要:目的 探讨食管癌组织中异质性细胞核核糖核蛋白A2B1(HNRNPA2B1)的表达及临床意义.方法 通过基因表达综合(GEO)数据库GSE160269数据集下载食管癌单细胞数据,数据更新时间为2020年11月29日,分析HNRNPA2B1的表达情况.下载癌症基因组图谱(TCGA)数据库中食管癌转录组测序的每千个碱基的转录每百万映射读取的片段数(FPKM)定量数据(包含173例食管癌患者样本,其中162例为食管癌组织,11例为癌旁正常组织)以及生存数据.利用TCGA数据库中食管癌的FPKM定量数据进行分析,选取HNRNPA2B1相关度最高的前250个基因,通过R4.3.0 clusterProfiler包对选取的基因集进行基因本体(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析.将TCGA数据库中食管癌的FPKM定量数据导入CIBERSORTx网站,获得免疫浸润细胞丰度评分,分析HNRNPA2B1与免疫细胞浸润程度的相关性.收集人食管癌组织芯片(包括114例食管鳞状细胞癌组织和66例癌旁正常组织)患者的临床病理资料,患者手术时间2006年1月至2008年12月,随访时间截至2015年7月;采用多色免疫组织化学染色(mIHC)检测食管癌组织芯片中细胞角蛋白(CK)、HNRNPA2B1的表达情况,并进行多光谱组织成像.TCGA数据库中数据通过R4.3.0 survival包和survminer包计算HNRNPA2B1基因表达的最佳临界值(cut-off值),组织芯片中数据通过CK+HNRNPA2B1+细胞比例计算HNRNPA2B1表达的cut-off值,根据cut-off值将食管癌患者分为高表达组和低表达组,比较两组总生存(OS),采用Cox比例风险模型分析OS的影响因素.结果 GSE160269数据集食管癌单细胞数据中,HNRNPA2B1在肿瘤上皮细胞中的表达水平高于正常上皮细胞,在免疫细胞不同亚群中呈现高表达.HNRNPA2B1高表达水平与调节性T细胞、初始B细胞、记忆性CD4+T细胞呈正相关.GO富集分析显示HNRNPA2B1主要参与核分裂的生物学过程;细胞组分主要富集于染色体区域;分子功能主要富集于ATP水解活性.KEGG富集分析显示HNRNPA2B1主要参与细胞周期、剪接体、DNA复制等生物学过程.mIHC和多光谱组织成像分析结果显示,CK主要表达在肿瘤细胞及正常食管上皮细胞胞膜,HNRNPA2B1主要表达于肿瘤细胞及正常食管细胞胞核;食管癌组织中HNRNPA2B1表达水平高于癌旁正常组织(U=2 984.00,P<0.05).基于组织芯片和TCGA数据库数据的生存分析结果显示,HNRNPA2B1低表达食管癌患者OS均优于HNRNPA2B1高表达患者(均P<0.05).Cox多因素回归分析结果显示,年龄(HR=1.919,95%CI:1.158~3.182,P=0.011)、TNM 分期(HR=2.404,95%CI:1.374~4.207,P=0.002)、T分期(HR=2.349,95%CI:1.150~4.789,P=0.019)和肿瘤上皮细胞 HNRNPA2B1 的表达(HR=2.160,95%CI:1.280~3.647,P=0.004)是食管癌患者OS的独立影响因素.结论 食管癌组织中HNRNPA2B1蛋白高表达可能参与食管癌的发生、发展,可作为食管癌预后评估的重要生物学标志.