本发明涉及一种同时检测三种曲霉的引物探针组合和荧光定量PCR试剂盒,属于病原微生物体外分子检测技术领域。本发明提供了一种基于荧光PCR法同时检测三种曲霉的引物探针组合,所述曲霉包括烟曲霉、黄曲霉和黑曲霉,所述引物包括上游引物和下游引物,所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,所述下游引物的序列如SEQ ID NO.2所示,所述探针为在SEQ ID NO.3所示序列的5’端修饰有荧光基团、3’端修饰有荧光猝灭基团的物质。本发明提供的引物探针组合能够实现烟曲霉、黄曲霉和黑曲霉的同时检测,检测特异型强,灵敏度高。