本发明涉及甘蔗种苗的繁殖生产,提供一种去除甘蔗宿根矮化病菌、快速繁殖健康甘蔗种苗的方法,包括如下步骤:热水处理少量原种并生产、以其再生植株经斑点酶标免疫试验(DB-EIA)检测为阴性的茎尖为外植体,经诱导培养、继代增殖培养、促根培养、假植及二级或三级苗圃扩繁生产健康种苗,并在苗圃扩繁中注意砍种工具(蔗刀)的消毒,在种苗出圃用于大田生产用种前,抽样取蔗茎汁用DB-EIA检测RSD病菌,确保提供合格种苗。本发明的优点是:能彻底去除甘蔗种苗宿根矮病病原菌,年繁殖系数高达1万倍以上,且种苗无变异,具有快速、高效、安全的优点,适合工厂化、规模化、标准化生产甘蔗健康种苗。