本发明公开了一种利用大肠杆菌原核表达系统生产的小麦蛋白质二硫键异构酶及方法和应用。采用技术方案是:从小麦幼叶中提取小麦总RNA,经RT-PCR获取wPDI基因。将目的基因连接到载体PET-30b中,构建重组质粒。将重组质粒转入到大肠杆菌BL21感受态细胞中,在LB培养基中诱导表达,培养重组大肠杆菌,离心收集菌体细胞;用超声法破碎菌体细胞后,离心后收集上清液;经一次Ni-sepharose亲和层析,获得wPDI。本发明通过大肠杆菌表达系统,实现了wPDI大量表达和简便的纯化工艺;获得的wPDI在面粉的加工品质实验中显示了良好的改善小麦加工品质的作用,可用于面粉加工中。