本发明公开了一种大肠杆菌热不稳定肠毒素的制备方法，该法通过在酵 母细胞中进行胞内表达或者分泌表达LT或LTB。在真核酵母细胞中外源表达 LT及其突变体或其亚单位，能够大幅提高其表达水平。本发明构建了多拷贝 的LT或LTB亚基表达盒，增加了LT或LTB在酵母中的基因剂量，同时将LT 或LTB基因重组在毕赤酵母表达载体的强启动子醇脱氢酶(AOX)启动子之 后，由甲醇诱导外源蛋白在酵母细胞中高表达，最终提高了LT及其突变体 或LTB在酵母细胞中的表达水平，使得下游纯化更简单，临床使用更安全。 本发明生产成本低、目的蛋白产量高，这对于规模化生产粘膜佐剂及其临床 应用具有重要的现实意义。
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