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氯离子通道蛋白1的缺失突变体CLIC1(△49-51)与Sedlin蛋白相互作用的研究

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目的 探究胞内氯离子通道蛋白1(CLIC1)的缺失突变体CLIC1(△49-51)在哺乳动物细胞中的表达、定位改变,及与Sedlin蛋白在体内、体外相互作用的影响.方法 构建CLIC1的缺失突变体的真核表达质粒pcDNA3.1-CLIC1(△49-51)-FLAG;免疫荧光观察CLIC1(△49-51)与Sedlin在COS7细胞中的共定位;在HEK 293T细胞中进行免疫共沉淀和GST pulldown实验,研究CLIC1(△49-51)与Sedlin的相互作用.结果 CLIC1(△49-51)在COS7细胞中主要定位于细胞质,小部分定位于细胞核.相对于野生型CLIC1的细胞核定位,缺失突变体的细胞内定位发生明显改变并且与Sedlin蛋白没有共定位.Western blot结果显示CLIC1(△49-51)能在HEK 293T细胞中有效表达;免疫共沉淀实验结果表明其与Sedlin在体内没有相互作用;GST pulldown结果表明其与Sedlin在体外没有相互作用.结论 CLIC1蛋白的第49～51位氨基酸序列KRR对CLIC1蛋白在细胞内的正确定位发挥重要作用;其缺失突变后影响了CLIC1在细胞内的定位、表达及CLIC1与Sedlin的相互作用.
Interaction between deletion mutant CLIC1 (△49-51) and Sedlin

洪翠丽、金振辉、朱亮亮、潘林鑫、耿慧武、刘晓颖

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安徽医科大学生命科学学院生物学系,合肥230032

CLIC1缺失突变体 免疫荧光 免疫共沉淀 GST pulldown

国家自然科学基金国家自然科学基金国家自然科学基金安徽省高校自然科学研究项目

817729083170203081201368KJ2017A203

2018

安徽医科大学学报
安徽医科大学

安徽医科大学学报

CSTPCD北大核心
影响因子：1.095
ISSN：1000-1492
年,卷(期)：2018.53(11)
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