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基于同源重组原理快速验证fim家族基因簇对鲍曼不动杆菌蹭动的影响

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目的 旨在利用含有抗生素耐药盒的线性PCR片段对鲍曼不动杆菌靶基因片段进行同源重组替换，实现基因的快速敲除及功能验证。方法 以鲍曼不动杆菌Ab4294菌株为研究对象，PCR分别扩增fim基因簇(全长4980 bp)上游901 bp、下游1028 bp的序列作为重组的同源臂;从pUC57质粒中扩增获得卡那霉素抗生素耐药盒(KanR);利用重叠延伸PCR技术将上述3个片段连接，并将连接片段转化至鲍曼不动杆菌Ab4294中，筛选获得基因缺失突变株，构建质粒回补株，对所得菌株进行表型鉴定，探究fim基因簇的功能。结果 利用含有抗生素耐药盒的线性PCR片段同源替换的方法成功构建了fim基因簇缺失的鲍曼不动杆菌Ab4294突变菌株;缺失菌株与野生株相比生长速率无明显差异，蹭动运动能力明显下降，回补该基因簇后表型恢复。结论 利用含有抗性耐药盒的线性PCR片段同源替换的方法成功敲除鲍曼不动杆菌Ab4294的fim家族基因簇，该基因簇编码产物参与鲍曼不动杆菌的蹭动运动。
Rapid verification of the effect of fim family genes on the motility of Acinetobacter baumannii based on homologous recombination

Acinetobacter baumanniideletion mutantfim gene clustertwitching motility

孙千姿、宁年智、王慧

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安徽医科大学基础医学院,合肥 230032

军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室,北京 100071

鲍曼不动杆菌 基因敲除 fim基因簇 蹭动运动

病原微生物生物安全全国重点实验室自主研究课题

SKLPBS2228

2024

10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2024.01.002

安徽医科大学学报
安徽医科大学

安徽医科大学学报

CSTPCD北大核心
影响因子：1.095
ISSN：1000-1492
年,卷(期)：2024.59(1)
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