摘要
高粱(Sorghum bicolor)是世界上仅次于小麦、水稻、玉米和大麦的重要粮食作物之一,虽然高粱基因组已经完成了测序,但是针对高粱测序品种BTx623,遗传转化方法的缺乏限制了高粱遗传育种和功能基因组研究的发展.而原生质体瞬时表达技术,则因为其高效、快速的特性,在功能基因组研究中具有重要的作用.为了在高粱品种BTx623中建立原生质体瞬时表达体系,本研究以BTx623幼苗为材料,对原生质体分离过程中的渗透压、酶液成分、酶解时间进行研究.结果表明:BTx623幼苗的原生质体分离过程中,最佳酶解液组成为1％纤维素酶、0.25％离析酶、0.6 mol/L甘露醇、10 mmol/L 吗啉乙烷磺酸、1 mmol/L CaCl2、0.1％小牛血清蛋白和5 mmol/Lβ-巯基乙醇,并获得了每毫升1×107个的高质量原生质体,所获原生质体活性在90％以上.之后利用PEG介导的转化方法,将含有35S::egfp 的质粒导入到原生质体中,并通过荧光显微观察统计,遗传转化率达到(61.31±3.91)％.本研究通过优化高粱品种BTx623原生质体制备及瞬时转化的条件,成功建立了其原生质体瞬时表达体系,为进一步开展高粱品种BTx623功能基因组的研究奠定了基础.
基金项目
三峡区域珍稀植物遗传发育与种质创新重点实验室开放基金(2018KZW01)
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