中文摘要： 目的 明确加味补阳还五汤调控大网膜脂肪干细胞(ADSCs)旁分泌肝细胞生长因子(HGF)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的作用机制,探讨该作用对腹膜间皮细胞TGF-β1/Sma和Mad相关蛋白(Smad)3信号通路及其下游上皮-间充质转化(EMT)、细胞外基质的影响,为临床防治术后腹腔粘连(PAA)提供依据.方法 用0、5、10、20 g/L加味补阳还五汤培养ADSCs取得其条件培养基,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测以上各浓度的培养基中HGF、TGF-β1含量变化.制作中药培养基(以上述最佳质量浓度的加味补阳还五汤培养的ADSCs培养基)、普通培养基(正常ADSCs培养基)、低HGF培养基(低表达HGF的ADSCs培养基),ELISA法检测不同培养基干预腹膜间皮细胞前后HGF的含量.3种培养基分别干预TGF-β1诱导的腹膜间皮细胞EMT模型,运用蛋白质印迹法(Western blotting)、免疫荧光(IF)、qPCR方法,检测腹膜间皮细胞的TGF-β1/Smad信号通路相关蛋白、EMT相关蛋白和纤维连接蛋白(FN)的表达水平.结果 与加味补阳还五汤0 g/L相比,加味补阳还五汤5、10、20 g/L中HGF含量增加(P<0.01),TGF-β1含量降低(P<0.01).与普通培养基相比,中药培养基中HGF含量增加(P<0.01),低HGF培养基中HGF含量降低(P<0.01).综合Western blotting、qPCR、IF结果,与模型组相比,各组培养基均可降低Smad3磷酸化水平(P<0.05,P<0.01),下调锌指转录因子1表达(P<0.05,P<0.01),效果依次为中药培养基组>普通培养基组>低HGF培养基组;各组培养基均可升高E-cad表达(P<0.05,P<0.01),降低波形蛋白、FN表达(P<0.05,P<0.01);各组培养基均可抑制腹膜间皮细胞EMT,减少FN沉积,效果依次为中药培养基组>普通培养基组>低HGF培养基组.结论 大网膜中ADSCs旁分泌HGF水平低下,可能是容易发生PAA的重要因素之一;加味补阳还五汤可能主要通过促进ADSCs旁分泌HGF,减少其旁分泌TGF-β1,从上游阻断TGF-β1/Smad3信号通路,从而抑制腹膜间皮细胞EMT,减少FN等细胞外基质沉积,最终防治PAA.
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