摘要
为促进大豆脂肪氧合酶LOX-1的动力学及催化机理研究,并为LOX-1活性的合理调控提供科学依据,本研究利用FT-IR技术分析LOX-1在20～80 ℃范围内的热失活和高级结构变化,采用Omnic 6.0和Peakfit 4.12软件处理FT-IR光谱,结合傅里叶自去卷积(FSD)、二阶导数分辨和曲线拟合技术分析酰胺Ⅰ带,获得不同温度下LOX-1的二级结构含量,并进行热失活条件下LOX-1荧光光谱分析.研究结果显示:LOX酶活在50℃和55℃下随时间逐步降低,65℃时3 min内活性完全丧失,LOX-1酶对热具有敏感性.50～65 ℃时,α-螺旋和β-折叠的含量均在25％左右浮动,变化幅度较热失活小,说明LOX-1二级结构的改变不是其活性丧失的主要原因.荧光光谱显示时间延长和温度升高后,LOX-1的荧光发射峰未发生明显改变,说明50～65℃时活性位没有进一步将色氨酸残基暴露于溶剂中,很可能活性位只发生了微小变化.
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