摘要
为研究黑豆皮花青素抑制酪氨酸酶催化反应的动力学机制,在不同条件下研究黑豆皮花青素对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶的抑制特性,确定最佳抑制条件、抑制类型和半抑制浓度(IC50),并使用紫外和荧光光谱分析二者的相互作用机制.正交试验分析表明:黑豆皮花青素对酪氨酸酶单酚酶的最佳作用条件为黑豆皮花青素浓度0.6mg·mL-1、L-酪氨酸浓度6 mmol·L-1、温度37℃、时间15 min,此时抑制率高达50.37％;对二酚酶的最佳作用条件为黑豆皮花青素浓度0.8mg·mL-1、L-多巴浓度6mmol·L-1、温度35℃、时间10 min,此时抑制率52.45％.与VC相比,黑豆皮花青素对酪氨酸酶单、二酚酶的抑制作用更强.动力学试验表明,黑豆皮花青素对酪氨酸酶单、二酚酶活性有抑制作用,IC50分别为1.03和0.82 mg·mL-1,对酪氨酸酶有可逆的混合型抑制作用,其抑制常数Ki为0.61 mg·mL-1.紫外光谱分析表明,黑豆皮花青素使酪氨酸酶发生蓝移,表明此酶构象改变.荧光光谱分析表明,黑豆皮花青素对酪氨酸酶有静态猝灭作用,298,303和308 K时其结合位点数分别为0.76,0.71和0.65,结合常数KA分别为159.66,94.23和54.89 L·mol-1.研究结果说明黑豆皮花青素可以有效抑制酪氨酸酶活性,是天然植物来源的酪氨酸酶抑制剂.
基金项目
山西省高等学校科技创新项目(2019L0984)
吕梁学院精品在线开放课程建设项目(JPZX201804)
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