摘要
为了探讨转基因大豆品系及其衍生产品鉴定的高效技术手段,本研究建立了转基因大豆的微滴式数字PCR(ddPCR)筛选检测方法.利用3种方法提取大豆基因组DNA,分析提取方法和保存时间对微ddPCR检测拷贝数的影响.同时,应用特异性引物,以4种转基因大豆筛选靶标元件为扩增靶标,对微滴式数字PCR检测方法进行体系优化、灵敏度测试和准确度验证.结果表明:使用Promega植物基因组DNA提取试剂盒,提取的DNA对转基因作物的外源拷贝数进行鉴定的结果更为准确可靠.与荧光定量筛选方法相比,ddPCR方法更加灵敏和准确.检测体系的最适探针浓度为100 nmol·L-1,最佳退火温度为58℃.以4种靶标元件CaMV35S启动子、T-NOS终止子、pat基因和T-E9终止子开展ddPCR检测,检测灵敏度较高,准确性较好.转基因大豆含量为1％时对CaMV35S和T-NOS靶标参数的绝对检测限为2个拷贝,pat为5个拷贝,T-E9为10个拷贝.本研究建立的ddPCR检测方法可用于大豆转化体的定量检测.
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