摘要
大豆Glyma03g263000基因编码1个RING-H2 zinc finger蛋白,其表达水平受大豆胞囊线虫侵染影响.为促进该基因在抗线虫研究中的应用,利用生物信息学和PCR方法对该基因序列进行分析,并从抗病大豆品种中克隆基因CDS区.构建pET30a-Glyma03g263000原核表达载体,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株中,并诱导Glyma03g263000蛋白表达,设置不同菌液浓度、IPTG浓度、温度及诱导时间,并采用SDS-PAGE电泳方法进行检测,分析诱导该蛋白表达的较好条件.结果显示:Glyma03g263000基因编码260个氨基酸,蛋白分子质量为27.88 kDa,在102～145个氨基酸区间具有1个RING保守结构域.温度是影响该蛋白表达的主要因素.该蛋白是不溶于水的包涵体蛋白,经变性裂解等试剂处理后可获得纯化蛋白.研究结果为GIyma03g263000蛋白的功能分析奠定了理论及材料基础.
基金项目
国家自然科学基金(31801725)
黑龙江省教育厅基本科研业务费科研项目(135309361)
齐齐哈尔大学研究生创新科研项目()
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