大豆科学2023，Vol.42Issue(5) ：579-585.DOI:10.11861/j.issn.1000-9841.2023.05.0579

大豆转化体E8A7027外源T-DNA分析及特异性检测体系建立

Analysis and Specific Detection System Establishment of T-DNA Insertions for Transgenic Soybean E8A7027

闫伟 马月 谢彦博 董立明 龙丽坤 李葱葱 张玲 李飞武
大豆科学2023，Vol.42Issue(5) ：579-585.DOI:10.11861/j.issn.1000-9841.2023.05.0579
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大豆转化体E8A7027外源T-DNA分析及特异性检测体系建立

Analysis and Specific Detection System Establishment of T-DNA Insertions for Transgenic Soybean E8A7027

闫伟 1马月 1谢彦博 1董立明 1龙丽坤 1李葱葱 1张玲 1李飞武1
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作者信息

  • 1. 吉林省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所,吉林长春 130033
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摘要

为进一步分析转AgGlpF基因耐盐转基因大豆E8A7027转化体的分子特征信息并对其进行特异性检测,本研究分离该转化体的旁侧序列并建立其特异性PCR检测体系.基于基因组重测序技术并结合Sanger测序技术,将基因组重测序分析获得的序列信息与参考大豆基因组进行对比,确定E8A7027转化体的T-DNA区在大豆基因组上的插入位点及其5'端和3'端的旁侧序列.根据旁侧序列设计PCR检测引物,并对检测体系的特异性、灵敏度进行实验室内验证.结果显示:转基因大豆E8A7027的整合位点为Chi09染色体的33886331位点,整合方式为单拷贝插入,受体基因组DNA在插入位点缺失了 1段58 bp序列,分别获得E8A7027大豆的5'端旁侧序列910 bp和3'端旁侧序列802 bp.根据这两个旁侧序列设计引物建立的PCR检测方法,能够特异性地将E8A7027大豆转化体与其他转基因作物和非转基因大豆区分开,方法的检测灵敏度为0.05％.研究结果可为E8A7027转化体的安全评价和监管检测提供技术支撑.

关键词

转基因大豆/高通量测序/旁侧序列/微滴式数字PCR/转化体特异性检测

Key words

transgenic soybean/high-throughput sequencing/flanking sequence/droplet digital PCR/event-specific detection

引用本文复制引用

基金项目

吉林省农业科技创新工程项目(CXGC2021TD021)

出版年

2023
大豆科学
黑龙江省农业科学院

大豆科学

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.641
ISSN：1000-9841
参考文献量4
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