选取10头经检测确定为猪瘟抗原抗体双阴性的断奶外三元仔猪,随机分为A、B组,每组5头.A组(对照组)仔猪肌肉注射灭菌生理盐水(1 mL·头-1),B组(兔脾淋组织注射组)仔猪肌肉注射兔脾淋组织(1 mL·头-1).注射后的第3天,采集仔猪外周血,基于Illumina测序平台进行转录组测序分析,筛选差异表达基因,进行基因本体(GO)及京都基因和基因组数据库(KEGG)富集分析,并采用RT-qPCR验证差异表达基因的表达水平.结果显示:A、B两组样品的测序长度均约为6×109 bp,测序质量符合要求;两组外周血细胞共筛选到差异表达基因1246个.GO富集结果表明,差异表达基因富集到的生物过程有56个GO条目,细胞组成有19个GO条目,分子功能有10个GO条目.KEGG富集结果表明,共有17条显著性富集KEGG通路.本研究重点分析了A、B两组样品T细胞受体和Toll样受体的KEGG通路,验证差异表达基因的表达水平,结果显示,与A组相比,B组CD4/8、TCRα、AP?1、NAFT基因的表达水平显著上调,与转录组数据一致.以上结果表明,兔脾淋组织肌肉注射第3天可显著影响猪外周血转录组谱,特别是可调节T细胞受体和Toll样受体的KEGG通路,提高猪的免疫功能.
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