黄瓜是一种重要的蔬菜作物,品种资源较为丰富,利用分子标记进行黄瓜资源鉴定和分类、构建分子遗传图谱和基因定位方面已取得一定进展,目前应用的分子标记主要包括RAPD、AFLP和SSR,尚未见有关于ISSR标记在黄瓜上的研究报道.ISSR主要是由单一引物且以重复序列为主要引物序列的PCR标记,其反应条件受模板DNA、Taq DNA聚合酶、Mg2+、dNTPs和引物等因素的影响.正交试验设计能明确各因素间的互作效应,建立最优化的反应体系.本研究利用这一方法,从Taq酶、dNTPs、引物、Mg2+4种因素各3个水平来优化黄瓜ISSR反应体系.通过实验,在25μl反应体系中初步确定各反应成分为:1×PCR buffer,1.5mmol/L Mg2+,25ng黄瓜模板DNA,ddH2O,1UTaq酶,200μmol/L dNTPs,0.75μmol/L引物.这一体系的建立为今后利用ISSR技术进行黄瓜种质资源分类、遗传图谱构建和基因定位奠定了技术基础.
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