本研究以芦笋基因组总DNA为模板,通过对芦笋SRAP反应体系的重要参数进行优化,建立了一套适用于芦笋的SRAP反应体系:25 Μl的反应体系中,模板DNA量80ng、Mg2+浓度3.0 mmol/L、上下游引物各0.2 μmol/L、dNTPs 0.3 mmol/L、Taq DNA聚合酶1 U以及1×Buffer.扩增程序为:94℃预变性3 min;94℃30 s、35℃30 s、72℃1.5 min,5个循环:然后退火温度提高到50℃,35个循环;最后72℃延伸10 min.比较琼脂糖凝胶和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测SRAP扩增产物的多态性,结果发现:6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测扩增产物比琼脂糖的效果好.利用该优化体系筛选引物,从256个SRAP引物组合中筛选出239个,它们具有扩增条带清晰、丰富、重复性好的优点,证明了此优化体系稳定可靠.
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