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柑橘大实蝇化学感受蛋白基因BminCSP3的克隆、表达及结合特征分析

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[目的]探究在柑橘大实蝇成虫触角高表达的化学感受蛋白BminCSP3与气味配体的结合特性,以期为揭示柑橘大实蝇嗅觉识别的分子机制提供一定理论依据.[方法]通过RT-PCR克隆BminCSP3基因,并对其进行生物信息学分析;以原核表达系统和镍柱体外表达纯化得到BminCSP3蛋白;利用荧光竞争结合实验检测BminCSP3与14种气味配体的结合特性.[结果]BminCSP3开放阅读框全长为474 bp,编码157个氨基酸,含有4个半胱氨酸残基,为典型的化学感受蛋白;预测其等电点为5.41,信号肽由22个氨基酸组成,无跨膜结构域,亲水性总平均值为-0.397,是亲水性蛋白.荧光竞争结合实验结果表明,BminCSP3与供试14种气味配体的亲和力均较弱,其Ki值均大于20 pmol·L-1.一般认为Ki值大于20 μmol·L-1,说明蛋白与配体分子间的亲和力较弱.[结论]BminCSP3虽然在柑橘大实蝇成虫触角中显著上调表达,但可能不参与柑橘大实蝇成虫的嗅觉识别过程;或本试验所用配体并非BminCSP3最适配体,应扩大配体库进一步验证BminCSP3的嗅觉功能.
Cloning,expression and binding characteristic of chemosensory protein BminCSP3 gene in Bactrocera minax(Diptera:Tephritidae)

王兆祥、陈剑、杨岭、田晓丽、桂连友、王福莲、张国辉

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长江大学农学院·长江大学昆虫研究所,湖北荆州434025

长江大学生命科学学院,湖北荆州434025

柑橘大实蝇 化学感受蛋白 原核表达 蛋白纯化 荧光竞争结合实验

国家自然科学基金面上项目

31972274

2022

10.13925/j.cnki.gsxb.20210336

果树学报
中国农业科学院郑州果树研究所

果树学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：1.486
ISSN：1009-9980
年,卷(期)：2022.39(3)
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