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柑橘褪绿矮缩病毒dot-ELISA检测方法的建立及应用

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[目的]柑橘褪绿矮缩病毒(Citrus chlorotic dwarf-associated virus,CCDaV)是一种新的柑橘病毒,为给我国柑橘脱毒苗木质量控制和田间监测提供技术支撑,建立了一种灵敏度高、特异性强的快速检测方法.[方法]通过序列分析和相似性比对,明确抗原靶标;构建CCDaV-CP的原核表达载体,诱导目的蛋白表达后作为抗原用于注射兔子,制备抗血清.运用Western blot检测效价.通过优化抗体浓度,建立CCDaV的dot-ELISA检测方法,明确其灵敏度,并用于田间疑似样品检测.[结果]以外壳蛋白(CP)的保守区域为靶标,成功构建了表达载体pET28a-CCDaV-CP,其在18℃,IPTG浓度0.5 mmol·L-1时,诱导12 h,目的蛋白的表达量高.制备的特异性抗血清效价为1:3000.由此建立的dot-ELISA检测方法在提取液被稀释640倍时,仍能检测出CCDaV.应用该方法对42份田间疑似样品的检测结果与PCR法的符合率为94.73％.[结论]首次获得了CCDaV的抗血清,并以此建立了快捷、灵敏、准确的dot-ELISA检测方法,为CCDaV的快速检测和防控提供了技术支撑.
Establishment and application of dot-ELISA detection method for Citrus chlorotic dwarf-associated virus

秦阳阳、陈香玲、王甲军、叶肖、申世凯、周彦

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西南大学柑桔研究所国家柑桔工程技术研究中心,重庆 400712

广西农业科学院园艺研究所,南宁 530007

柑橘褪绿矮缩病毒 外壳蛋白 抗血清 斑点酶联免疫吸附法

2019YFD1001802CARS-26-05Bcstc2019jcyj-msxmX0557

2022

10.13925/j.cnki.gsxb.20220275

果树学报
中国农业科学院郑州果树研究所

果树学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：1.486
ISSN：1009-9980
年,卷(期)：2022.39(11)
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