摘要
目的 为避免西尼罗病毒(WNV)研究中活病毒所带来的安全隐患,建立WNV的假病毒报告系统,用于抗WNV药物的筛选.方法 构建含有海蜃荧光素酶报告基因的WNV复制子重组质粒prWNV-Rluc及表达WNV结构蛋白C、M和E的重组质粒pcDNA3.1-CME,并共转染293T细胞,72 h后获取含有假病毒的培养上清.结果 用上清感染BHK21细胞后,BHK21细胞产生荧光,且荧光强度与感染细胞的假病毒量呈量效关系.Western印迹法实验检测到感染的BHK21细胞表达WNV NS1蛋白,证实上清中为WN假病毒.中和实验显示WNV中和性抗体能有效阻断WN假病毒对BHK21细胞的感染.结论 建立了WNV的假病毒报告系统,规避了生物安全3级实验室(BSL-3)操作,可用于抗WNV药物的筛选.
基金项目
国家“重大新药创制”科技重大专项子课题子任务(2018ZX10101003-005-009)
NETL
NSTL
维普
万方数据