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双孢蘑菇中精氨酸酶的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

Prokaryotic expression,purification and polyclonal antibody preparation of arginase in Agaricus bisporus

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目的 提供一种制备精氨酸酶特异性多克隆抗体的方法.方法 首先对双孢蘑菇中编码精氨酸酶的基因(AbArg)进行聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增,构建重组质粒pET-28a(+)-Arg,再将质粒转入感受态细胞E.coli BL 21中诱导表达,获得含有6×His标签的融合蛋白,最后用纯化后的蛋白免疫新西兰大白兔,获得抗血清.结果 构建了重组质粒pET-28a(+)-Arg,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表明诱导出的融合蛋白以包涵体形式存在,经纯化后得到的融合蛋白纯度>90％、浓度>0.5 mg/ml.用间接ELISA法测定抗体的效价达51200.Western印迹实验表明制备的多克隆抗体特异性良好,可成功识别双孢蘑菇中的精氨酸酶蛋白.结论 成功制备了精氨酸酶的多克隆抗体,为进一步研究精氨酸代谢的机制奠定了基础.

奚志嫒、杨可心、孟德梅

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300457 天津,天津科技大学食品科学与工程学院,省部共建食品营养与安全国家重点实验室

精氨酸酶 融合蛋白 多克隆抗体 免疫印迹

国家自然科学基金天津市京津冀三地联合攻关项目

3150154419YFSLQY00100

2020

10.13220/j.cnki.jipr.2020.08.009

国际药学研究杂志
军事医学科学院毒物药物研究所，中国药学会

国际药学研究杂志

CSTPCD
影响因子：0.806
ISSN：1674-0440
年,卷(期)：2020.47(8)
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