摘要
目的 从噬菌体展示单链抗体库中筛选获得人源抗人C3d单链抗体,并评价其结合活性.方法 以人C3d重组蛋白包被免疫管,对噬菌体展示单链抗体库进行固相筛选;C3d包被量逐轮降低,洗涤强度逐轮增强.采用ELISA对筛选产出进行鉴定,选择阳性克隆,测序确定阳性单链抗体基因.分子克隆构建单链抗体的真核表达载体,转染HEK293-F细胞进行真核表达,镍柱亲和纯化获得单链抗体.采用生物膜干涉技术(BLI)检测单链抗体与重组人C3d的结合活性.结果 经3轮筛选获得3个特异性结合C3d的噬菌体单链抗体(A1、A3和B6),重组表达获得高纯度的单链抗体蛋白,与C3d重组蛋白结合活性为22.7～171 pmol/L.结论 获得了全新的高亲和力人源抗人C3d单链抗体.
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