摘要
目的 在大肠杆菌中异源表达和纯化人源Parkin蛋白.方法 构建带有人源Parkin基因的克隆载体,测序保证Parkin基因序列正确后,构建异源表达载体pET-28a/Parkin;在Escherichia coli BL21(DE3)中诱导人源Parkin蛋白过表达,采用镍亲和色谱纯化人源Parkin蛋白,用Western印迹(WB)和荧光分光光度法评价人源Parkin蛋白活性.结果 人源Parkin蛋白在E.coli BL21(DE3)中获高表达,经镍亲和色谱纯化后除去了大量杂蛋白,得到富集;WB和荧光分光光度法检测均证实异源表达的人源Parkin蛋白具有生物活性.结论 通过异源表达技术获得高纯度的且具有生物活性的人源Parkin蛋白,可用于Parkin调节剂的快速筛选与研究.
基金项目
国家自然科学基金资助项目(81660596)
云南省应用基础研究计划项目(201801CH00227)
云南省应用基础研究计划项目(2017FF117-013)
云南省中青年学术和技术带头人后备人才(2019HB053)
云南省教育厅科学研究基金(2019Y0314)
云南省刘昌孝院士工作站()
NETL
NSTL
维普
万方数据