南方农业学报2020，Vol.51Issue(11) ：2731-2737.DOI:10.3969/j.issn.2095-1191.2020.11.016

松材线虫效应蛋白Bx-FAR-1的原核表达与活性测定

Prokaryotic expression and activity research of Bursaphelenchus xylophilus effector protein Bx-FAR-1

李煜 吴小芹 胡龙娇
南方农业学报2020，Vol.51Issue(11) ：2731-2737.DOI:10.3969/j.issn.2095-1191.2020.11.016
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松材线虫效应蛋白Bx-FAR-1的原核表达与活性测定

Prokaryotic expression and activity research of Bursaphelenchus xylophilus effector protein Bx-FAR-1

李煜 1吴小芹 1胡龙娇1
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作者信息

  • 1. 南京林业大学南方现代林业协同中心/南京林业大学林学院,南京 210037;江苏省有害生物入侵预防与控制重点实验室,南京 210037
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摘要

[目的]纯化获得松材线虫效应蛋白Bx-FAR-1并验证其体外活性,为后续研究效应蛋白Bx-FAR-1参与松材线虫侵染松树的分子机制打下基础.[方法]利用PCR技术从松材线虫cDNA中扩增出效应基因Bx-FAR-1,用同源重组的方式将目的片段连接至原核表达载体pET-32a(+).通过原核表达系统诱导并纯化获得大量效应蛋白Bx-FAR-1,利用SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blotting对纯化获得的蛋白进行鉴定,同时通过本氏烟瞬时表达系统验证蛋白活性.[结果]从松材线虫cDNA中成功扩增出Bx-FAR-1基因(BXY_1685000.1);通过同源重组成功获得重组表达载体pET32a-BxFAR,并转化至大肠杆菌BL21感受态细胞.当诱导条件为15℃下150 r/min诱导16 h时重组蛋白以可溶性形式表达,且蛋白表达量高.效应蛋白Bx-FAR-1活性测定结果显示,当蛋白浓度达100 nmol/L时,可抑制致病疫霉的病原相关分子模式(PAMP)INF1引起的烟草细胞坏死.[结论]松材线虫效应蛋白Bx-FAR-1可抑制寄主植物的免疫反应.

关键词

松材线虫/效应蛋白/原核表达/蛋白纯化

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基金项目

国家重点研发计划项目(2018YFD0600203)

江苏高校优势学科建设工程项目(PAPD)

出版年

2020
南方农业学报
广西壮族自治区农业科学院

南方农业学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.83
ISSN：2095-1191
被引量1
参考文献量4
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