南方农业学报2021，Vol.52Issue(1) ：238-244.DOI:10.3969/j.issn.2095-1191.2021.01.029

卵形鲳鲹RelB蛋白原核表达及其多克隆抗体制备

Prokaryotic expression and polyclonal antibody preparation of RelB protein in golden pompano(Trachinotus ovatus)

段家文 乔瑞峰 雷坤 杨萌 陆专灵 韦友传
南方农业学报2021，Vol.52Issue(1) ：238-244.DOI:10.3969/j.issn.2095-1191.2021.01.029
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卵形鲳鲹RelB蛋白原核表达及其多克隆抗体制备

Prokaryotic expression and polyclonal antibody preparation of RelB protein in golden pompano(Trachinotus ovatus)

段家文 1乔瑞峰 1雷坤 1杨萌 1陆专灵 2韦友传1
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作者信息

  • 1. 广西大学动物科学技术学院,南宁 530005
  • 2. 广西水产科学研究院/广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室,南宁 530021
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摘要

[目的]制备卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)RelB蛋白(TroRelB)多克隆抗体,为深入研究TroRelB蛋白的结构、功能及蛋白—蛋白相互作用打下基础.[方法]将TroRelB基因与pET-32a表达载体连接构建pET-32a-TroRelB重组质粒,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞,采用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,以Ni-IDA琼脂糖纯化树脂柱纯化的TroRelB重组蛋白免疫Balb/C小鼠制备多克隆抗体,应用ELISA和Western blotting分别检测抗体效价及特异性.[结果]以构建的pET-32a-TroRelB重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导能成功表达获得TroRelB重组蛋白,其相对分子量为84.0 kD,且主要以包涵体的形式进行表达.经Ni-IDA琼脂糖纯化树脂柱纯化透析的TroRelB重组蛋白浓度为0.498 mg/mL,能被抗His标签抗体识别.以纯化TroRelB重组蛋白免疫Balb/C小鼠获得抗TroRelB血清(多克隆抗体),ELISA检测结果显示其抗体效价为1:256000;Western blotting检测结果显示,5和15 ng的TroRelB重组蛋白均可特异性结合TroRelB多克隆抗体,而阴性对照(免疫前血清)未出现预期条带.[结论]原核系统诱导表达的TroRelB重组蛋白主要以包涵体的形式进行表达,且携带有His标签,以其免疫Balb/C小鼠制备获得的TroRelB多克隆抗体具有较强的特异性和较高的抗体效价,可用于深入研究TroRelB蛋白的生物学功能及揭示卵形鲳鲹的免疫机制.

关键词

卵形鲳鲹/RelB蛋白/原核表达/重组蛋白/多克隆抗体

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基金项目

国家自然科学基金(31860736)

广西创新驱动发展专项(桂科AA17204094)

出版年

2021
南方农业学报
广西壮族自治区农业科学院

南方农业学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.83
ISSN：2095-1191
被引量3
参考文献量10
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