摘要
[目的]基于酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测原理,建立高灵敏度的直接竞争法检测木薯粉及其制品中的黄曲霉毒素B1(AFB1),为木薯食品安全提供技术支持.[方法]通过对AFB1抗原结构改造、免疫和细胞融合等过程获得抗原抗体,建立高灵敏度检测方法,并进行木薯粉及其制品样本的实例验证.[结果]制备的AFB1抗原和抗体,其抗体亚型均为IgG1,灵敏度最高的3F2细胞株产生的抗体对黄曲霉毒素G1、G2和B2交叉反应率分别为21.4％、1.9％和8.8％,且对其他毒素类无交叉反应,建立的ELISA线性区间为0.02～0.48μg/kg,半数抑制浓度(IC50)为0.047μg/kg,标准方程为y=-3.074x-4.3066(R2=0.9978).以35％甲醇水溶液作为标准品稀释液,木薯食品原料用70％甲醇水溶液加0.2 g NaCl作为提取液,含油脂的木薯糕点用70％甲醇水溶液作为提取液,所有样本均为10倍稀释,检测限0.2～4.8μg/kg,样品添加回收率81.5％～120.0％,变异系数均小于8.5％.应用验证试验表明,自建ELISA试剂盒对96份样本检出19份阳性样本,购买试剂盒检出7份阳性,大于2.0μg/kg的样本检测结果完全符合,自建ELISA试剂盒方法灵敏度优于购买的ELISA试剂盒.[结论]本研究建立的直接竞争ELISA方法灵敏度高,操作简单,可广泛应用于木薯粉及其制品样本中AFB1的快速测定.
基金项目
国家重点研发计划(2018YFF0213502)
现代农业产业技术体系建设项目建设专项(CARS-11-HNZZW)
中国热带农科院基本科研业务费专项(1630052020018)
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